Resumen de Clasificación de los eventos de ruptura molecular entre estreptavidina y biotina medidos mediante microscopía de fuerza atómica de afinidad

Daniel Corregidor, Raquel Tabraue, Luis Colchero, Rafael Daza García, Manuel Elices Calafat, Gustavo Víctor Guinea Tortuero, José Pérez Rigueiro

• español

  Durante las últimas dos décadas se ha producido un crecimiento significativo del número de estudios centrados en la caracterización de las interacciones a nivel molecular que se producen en los sistemas biológicos. Una de las técnicas más versátiles y con mayor resolución para la caracterización de dichas interacciones es la Microscopía de Fuerza Atómica (AFM). Pese a las ventajas de esta técnica, las dificultades asociadas al proceso de preparación y la dificultad de la realización de los propios experimentos hacen que la aplicación de esta técnica esté lejos de considerarse un procedimiento habitual.

  En este trabajo, se presenta una alternativa robusta y versátil para el uso de la técnica de A-AFM (Microscopía de fuerza atómica de afinidad) en la caracterización de la interacción entre moléculas individuales. La funcionalización de las puntas se realiza mediante la técnica de silanización por vapor activado (AVS), con la que se deposita sobre la punta sensora una densidad superficial elevada de grupos amino empleados para el anclaje de diferentes moléculas orgánicas y biomoléculas, habiéndose utilizado en este caso como modelo la molécula biotina. Así, se ha caracterizado los eventos de unión-rotura entre la molécula biotina y la estreptavidina inmovilizada sobre un sustrato plano.

• English

  For the last two decades there has been a significant growth in the number of studies focused on the characterization of interactions at the molecular level that occur in biological systems. One of the most versatile techniques with the highest resolution for the characterization of these interactions is Atomic Force Microscopy (AFM). Despite the advantages of this technique, the difficulties associated with the preparation process and the difficulty of carrying out the experiments themselves mean that the application of this technique is far from being considered a common procedure.

  In this work, a robust and versatile alternative is presented for the use of the A-AFM (Affinity Atomic Force Microscopy) technique in the characterization of the interaction between individual molecules. The functionalization of the tips is carried out using the activated vapor silanization (AVS) technique, with which a high surface density of amino groups used for the anchoring of different organic molecules and biomolecules is deposited on the sensor tip, having been used in this case as a model the molecule biotin. Thus, the binding-breaking events between the biotin molecule and streptavidin immobilized on a flat substrate have been characterized.