Resumen de Análisis en subpoblaciones espermáticas ovinas del daño en el ADN

C. Colás, Patricia Grasa, José Álvaro Cebrián Pérez, María Teresa Muiño Blanco

• español

  Durante la espermiogénesis se produce la eliminación del citoplasma y el cese de la transcripción,dejando al espermatozoide incapacitado para sufrir reparaciones del ADN. Por tanto, cualquier anomalía o dañoen el material genético, presente en origen o adquirido durante el procesamiento de la muestra seminal, influiráen el éxito de la inseminación y fecundación. El interés en analizar la presencia de daño en el ADN deespermatozoides ovinos nos ha llevado a la puesta a punto de dos técnicas: In Situ Nick Translation (ISNT) yTerminal Deoxynucleotidyl Transferase-Mediated Nick End Labelling (TUNEL). La primera resultó no seradecuada para el análisis de dicho parámetro, mientras que con la segunda se obtuvieron buenos resultados. Unaspecto de alto interés respecto al daño del ADN en semen fresco es determinar si este daño está generalizado enlas diferentes subpoblaciones celulares de un eyaculado o si puede ser adscrito a alguna población que posea, asu vez, alguna otra característica definida. La separación de subpoblaciones espermáticas mediante distribuciónen contracorriente con centrifugación (CCCD), y el posterior análisis del daño en el ADN en dichassubpoblaciones mediante TUNEL, permite concluir que existe una relación inversamente proporcional entre laintegridad de la membrana plasmática y la presencia de mellas en el ADN.

• English

  During spermiogenesis, the citoplasm is eliminated and transcription ceases, which make spermatozoaunable to repair DNA. Therefore, any damage in the genetic material, present in origin or acquired duringhandling, will be determinant for the success of insemination and fecundation. We have studied DNA damage inram spermatozoa with In Situ Nick Translation (ISNT) y Terminal Deoxynucleotidyl Transferase-MediatedNick End Labelling (TUNEL). Although the first did not work, the other was adequated for the analysis. Animportant aspect is if DNA damage is distributed in the different subpopulations of one ejaculate, or conversely,it is confined to an special subpopulations which is characterized by other feature/s. The use of centrifugalcountercurrent distribution (CCCD) and TUNEL let us to conclude that plasma membrane integrity andbreakage in DNA are two features of sperm cells inversely related.