Validación de PCR convencional para detectar Escherichia coli O157

• María Yepes-Pérez ^[2] ; Karent Carrero ^[2] ; Neil Vásquez ^[2] ; Elizabeth Correa ^[1]
  1. [1] Institución Universitaria Colegio Mayor de Antioquia

     Institución Universitaria Colegio Mayor de Antioquia

     Colombia

     
  2. [2] Universidad Nacional de Colombia-Sede Medellín, Colombia
• Localización: Información tecnológica, ISSN-e 0718-0764, ISSN 0716-8756, Vol. 33, Nº. 2 (Abril), 2022, págs. 3-12
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Validation of conventional PCR to detect Escherichia coli O157
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• Resumen
  • español

    El principal objetivo de este estudio es determinar el nivel de cuantificación necesario para detectar Escherichia coli O157 enterohemorrágica utilizando la reacción en cadena de la polimerasa (PCR). Se desarrolla la validación de PCR convencional evaluando sus genes de mayor virulencia: stx1, stx2 y rfbE. Los resultados de sensibilidad de PCR indican un límite de detección entre 0,011 y 0,33 ng μL-1 de ADN para stx1 y stx2 y de 0,0037 ng μL-1 de ADN para rfbE. El límite de corte inferior varía entre 0,033 y 0,099 ng μL-1 de ADN para stx1 y stx2, para rfbE es de 0,033 ng μL-1 de ADN. La selectividad (inclusividad y exclusividad) y la robustez son del 100% para los tres genes, demostrando la reproducibilidad del PCR para distinguir E. coli O157 de otros serotipos. Se concluye que la PCR convencional es una técnica que permite monitorear la presencia de E. coli O157 mediante sus genes de mayor virulencia (stx1, stx2 y rfbE).

  • English

    The main objective of this study is to determine the PCR quantification levels required for detecting enterohemorrhagic Escherichia coli O157 by examining its most virulent genes: stx1, stx2, and rfbE. The PCR’s sensitivity results show a detection limit between 0,011 ng μL-1 of DNA and 0,033 ng μL-1 of DNA for stx1 and stx2 and of 0,0037 ng μL-1 DNA for rfbE. The lowest cut-off limit ranged between 0,033 ng μL-1 of DNA and 0,099 ng μL-1 of DNA for stx1 and stx2, while for rfbE it is 0,033 ng μL-1 of DNA. The selectivity (inclusivity and exclusivity) and the robustness are 100% for the three genes examined, showing the PCR’s reproducibility for distinguishing E. coli O157 from the other serotypes. It is concluded that conventional PCR is a technique that allows monitoring the presence of E. coli O157 by targeting its most virulent genes (stx1, stx2, and rfbE).