Resumen de Utilización de marcadores moleculares para el diagnóstico e identificación taxonómica de protozoos parásitos en bivalvos

Jose Ignacio Navas Triano, Manuel Ángel Garrido Ramos, Carmelo Ruiz Rejón, Manuel Ruiz Rejón, Roberto de la Herrán Moreno, Inmaculada López Flores

• español

  El desarrollo del diagnóstico molecular basado en la detección desecuencias específicas de ADN ha revolucionado el diagnóstico en la patología de moluscos. Las patologías infecciosas son especialmente relevantes en la acuicultura de moluscos bivalvos debido principalmente a que el cultivo de estas especies se desarrolla en el medio natural, compartiendohábitat con las poblaciones naturales. Este hecho diminuye la utilidad dela aplicación de las medidas tradicionales de erradicación de enfermeda-des parasitarias. Por otro lado, el desplazamiento con fines comerciales deanimales vivos entre distintas zonas geográficas ha sido la principal fuente de propagación de las infecciones parasitarias. Por ello, el estableci-miento de programas de vigilancia y monitorización de la presencia de losagentes etiológicos responsables de estas enfermedades, resulta un método de control adecuado para evitar su propagación. La caracterización demarcadores moleculares de ADN en las distintas especies de patógenos,permite la aplicación de técnicas de biología molecular tales como la PCR y la hibridación in situ al diagnóstico de parásitos en bivalvos. La elevada sensibilidad, especificidad y la mayor rapidez en la obtención de resul-tados cuando se procesa un elevado número de muestras con respectoa las técnicas histológicas, facilitan enormemente la aplicación de estastécnicas como herramientas para la identificación de patógenos presentes en bivalvos. En este trabajo, tras realizar una revisión general sobre eltema, presentamos las metodologías seguidas en el diseño de métodos dediagnóstico molecular para la detección de tres protozoos responsables de otras tantas enfermedades parasitarias, Perkinsus olseni, Marteilia refringensy Bonamia ostreae, desde el aislamiento y caracterización de secuencias específicas del genoma de cada uno de ellos, hasta la aplicación de estos marcadores moleculares para la detección e identificación taxonómica dela especie parasitaria en muestras naturales.

• English

  The development of molecular diagnosis based on the detection of specificDNA sequences has revolutionized the diagnosis of mollusc pathologies.Infectious diseases are especially relevant in bivalve mollusc farming prima-rily because these species are grown in the natural medium, sharing a habitatwith natural populations. This situation diminishes the utility of applyingtraditional measures of eradicating parasite infestations. On the other handthe transport of live animals for commerce between different geographiczones has been the main factor in the propagation of parasites. Therefore, the establishment of programmes of vigilance and monitoring the presence ofagents responsible for these diseases constitutes the proper control to avoidsuch propagation. The characterization of DNA molecular markers in thedifferent pathogenic species permits the application of molecular biologicaltechniques such as PCR and in situ hybridization in diagnosing parasites inbivalves. The high sensitivity, accurate specificity, and the greater speed ingaining results when a high number of samples are processed, with respectto histological techniques, enormously facilitate the application of these tech-niques as tools to identify pathogens present in bivalves. In the present work,after a general review, we present the methodology followed in the designingof a molecular diagnostic method for the detection of three protozoa responsi-ble for many other parasite diseases: Perkinsus olseni, Marteilia refringensand Bonamia ostreae. We describe the method from isolation and charac-terization of sequences specific of the genome of each of these parasites, tothe application of these molecular markers for the detection and taxonomicidentification of the parasite species in the natural samples