Evaluación del potencial citotóxico de tensioactivos mediante ensayo del MTT en distintas líneas celulares

• Autores: Adela López de Cerain Salsamendi, Ana Jiménez Zabala, J. Terencio, A. Marin, José Bello Gutiérrez
• Localización: Revista de toxicología, ISSN 0212-7113, Vol. 13, Nº. 1, 1996, págs. 13-19
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Evaluation of cytotoxic potential of surfactants with MTT assay in different cell lines
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• Resumen
  • español

    Uno de los diversos métodos in vitro, que han sido propuestos como alternativa a los ensayos in vivo para determinar el potencial irritativo de nuevos compuestos, es el ensayo del MTT. El fundamento de este ensayo de citotoxicidad es que el MTT o Bromuro de (3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)- 2,5-difenil tetrazol), cuando es reducido por las deshidrogenasas mitocondriales se transforma en el correspondiente formazán, que precipita en forma de cristales coloreados. Estos cristales disueltos en dimetilsulfóxido presentan un máximo de absorción a 540 nm. La medida de la absorbancia es por consiguiente directamente proporcional al número de células viables. En este trabajo se ha evaluado mediante este ensayo, el potencial citotóxico de 10 tensioactivos pertenecientes a las cuatro clases posibles: Cloruro de Benzalconio y Bromuro de 1-hexadecilpiridina (catiónicos), Lauril sulfato sódico, ácido deoxicólico y Jordapon (aniónicos), Tritón X100 y TWEEN 20 (no iónicos) y Chaps, Chapso y Mirataine (anfóteros). Se han empleado cuatro líneas celulares de muy distinto origen (MDCK, SIRC, V-79 y HT-29), con objeto de ver si existían diferencias entre ellas y con las células epiteliales de córnea de conejo. Se han realizado tratamientos de 1h, 4h y 20h de duración, con y sin período de recuperación. La correlación con los datos in vivoy el orden relativo de citotoxicidad de los distintos compuestos se ha mantenido en todas las líneas celu lares y con todos los tratamientos. Se han obtenido resultados similares a los referidos en la literatura en cultivo primario de células epiteliales de córnea de conejo. En ningún caso se ha detectado reversibilidad del efecto tóxico.

  • English

    The MTT assay is one of the numerous in vitro methods, which have been proposed as alternative to the in vivo assays for determining the irritative potential of new compounds. The base of this cytotoxicity assay is that MTT or (3-[4,5-Dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium) bromide, when reduced by mitochondrial dehydrogenases to the corresponding formazan, precipitates in colored crystals. These crystals dissolved in dimethylsulfoxide present an absorption peak at 540 nm. Therefore, the measure of absorbance is directly proportional to the number of viable cells. In this study the cytotoxic potential of 10 surfactants pertaining to the four different categories has been evaluated: Benzalkonium Chloride and 1-hexadecilpiridine Bromide (cationics), Sodium Lauryl Sulphate, Deoxycolic Acid and Jordapon (anionics), Triton X-100 and TWEEN 20 (nonionics) and Chaps, Chapso and Mirataine (amphoterics). Four cell lines of very different origin (MDCK, SIRC, V-79 and HT-29) have been employed in order to verify if there was any difference between them and the corneal epithelial cells. Treatments of 1, 4 and 20 hours have been carried out, with and without a recuperation period. The correlation with in vivo data and the relative cytotoxicity ranking of different compounds was maintained in all the cell lines and with all the treatments. None of the results obtained appear to be different from those refered in the literature in primary culture of rabbit corneal epithelial cells. Reversibility of the toxic effect has not been detected in any case.