Resumen de Desarrollo de un ensayo de inhibición de Chlorella vulgarís, utilizando un test en microplacas

C. Ramos, Ana Isabel de la Torre Reoyo, J.V. Tarazona, María Jesús Muñoz Reoyo

• español

  Debido a la necesidad de disponer de métodos de ensayo prácticos que puedan procesar un gran número de muestras en un corto período de tiempo, se ha desarrollado un test alternativo al protocolo estandarizado por la OCDE para el test de inhibición de crecimiento en algas, sobre el mismo organismo de ensayo: Chlorella vulgarís. Se procedió con esta especie de alga unicelular como si de un cultivo celular se tratara, dotándola de condiciones de ensayo que posibilitaran un crecimiento exponencial rápido, y obteniéndose una relación lineal entre 0,4 y 1,25 de Absorbancia, en 48 horas, tiempo en el cual la población de Chlorella experimentó un crecimiento de 10 veces su densidad inicial. Este nuevo método se ha utilizado para determinar el efecto (CI50) de un compuesto: el 3,4-dicloroanilina (DCA), comparando el resultado con el obtenido con el test estandarizado. Los resultados obtenidos fueron 3,01 ppm a 72 horas y 3,75 ppm a 48 horas en el test estandarizado y el test en microplacas, respectiva mente. Estos resultados sugieren la utilidad de este test en microplacas, siendo una de sus mayores ventajas que permite trabajar con bajos volúmenes de muestra, un requerimiento necesario en los protocolos de Valoración por Identificación Toxicológica (VIT).

• English

  The development of new assays to process high number of samples in a short period of time is a clear nowadays. This paper presents an alternative test to standard OECD protocol for the Algal Growth Inhibition Test, using Chlorella vulgaris, an unicellular alga. The assay organism has been grown like a cellular culture under assay conditions which allowed a quick cellular growth, ten times higher than initial culture. A linear relationship between Absorbance and time was obtained for an Absorbance range between 0.4 and 1.25 in 48 hours. 3,4-dichloroaniline IC50 was calculated using this alternative method and results were compared with standardized test results. The IC50 values were 3.01 ppm at 72 hours and 3.75 ppm at 48 hours for the standard and the microplate test, respectively. The results suggest the capability of the microplate test, specifically to manage low sample volumes, a critical requirement for Toxicity Identification Evaluation (TIE) protocols.