Resumen de Ensayo piloto de conservación pulmonar hipotérmica prolongada para analizar la lesión de isquemia-reperfusión en cerdos

Amaya Ojanguren Arranz, Maite Santamaría Gómez, Lucía Milla, Carlos Alfredo Fraile Oliveros, Sonia Gatius Calderó, Sara Puy, Alba Boldó, Susana Gómez Ollés, Meritxell Boada Pérez, Cristina Esquinas López, Berta Sáez Giménez, Iñigo Ojanguren Arranz, Miriam Barrecheguren, Jorge Juan Olsina Kissler

• español

  Antecedentes En el trasplante de pulmón (TP), la duración del tiempo de isquemia es controvertida, ya que se estableció de forma arbitraria. Sería útil explorar el impacto del tiempo de isquemia fría (TIF) prolongado sobre la lesión de isquemia-reperfusión en un modelo experimental.

  Métodos Ensayo piloto experimental aleatorizado de grupos paralelos y análisis ciego final utilizando un modelo de TP en cerdos. Se extrajeron los órganos de los animales donantes (n = 8). Los pulmones se conservaron durante 6 horas (n = 4) o 12 horas (n = 4) en hipotermia aeróbica. El pulmón izquierdo se trasplantó y reperfundió durante 4 horas. Se obtuvieron biopsias de pulmón (i) al comienzo del TIF, (ii) al final del TIF, (iii) 30 minutos después de la reperfusión y (iv) 4 horas después de la reperfusión. Los injertos de pulmón se evaluaron histológicamente mediante la puntuación de daño histológico pulmonar y la relación de peso húmedo y peso seco. La respuesta inflamatoria se valoró mediante la determinación de citoquinas inflamatorias. Se determinó la actividad de caspasa-3 como marcador de apoptosis.

  Resultados No observamos diferencias en la puntuación de daño histológico pulmonar o en la relación de peso húmedo y peso seco en un momento dado entre los pulmones sometidos a 6 h-TIF o 12 h-TIF. Las IL-1β e IL-6 mostraron una tendencia ascendente durante la reperfusión en ambos grupos. El TNF-α alcanzó su punto máximo dentro de los 30 minutos posteriores a la reperfusión. Apenas se detectó IFN-γ. La inmunoexpresión de caspasa-3 se clasificó semicuantitativamente por el porcentaje de células teñidas. Se observó un 20% de células apoptóticas 30 minutos después de la reperfusión.

  Conclusiones Observamos que 6 y 12 horas de TIF fueron equivalentes en términos de daño histológico pulmonar, perfil inflamatorio y apoptosis en un modelo de TP en cerdos. La extensión de la lesión pulmonar, medida por la puntuación de daño histológico pulmonar, las citoquinas proinflamatorias y la determinación de caspasa-3 fue leve.

• English

  Background In lung transplantation (LT), the length of ischemia time is controversial as it was arbitrarily stablished. We ought to explore the impact of extended cold-ischemia time (CIT) on ischemia-reperfusion injury in an experimental model.

  Methods Experimental, randomized pilot trial of parallel groups and final blind analysis using a swine model of LT. Donor animals (n = 8) were submitted to organ procurement. Lungs were subjected to 6 h (n = 4) or 12 h (n = 4) aerobic hypothermic preservation. The left lung was transplanted and re-perfused for 4 h. Lung biopsies were obtained at (i) the beginning of CIT, (ii) the end of CIT, (iii) 30 min after reperfusion, and (iv) 4 h after reperfusion. Lung-grafts were histologically assessed by microscopic lung injury score and wet-to-dry ratio. Inflammatory response was measured by determination of inflammatory cytokines. Caspase-3 activity was determined as apoptosis marker.

  Results We observed no differences on lung injury score or wet-to-dry ratio any given time between lungs subjected to 6 h-CIT or 12h-CIT. IL-1β and IL6 showed an upward trend during reperfusion in both groups. TNF-α was peaked within 30 min of reperfusion. IFN-γ was hardly detected. Caspase-3 immunoexpression was graded semiquantitatively by the percentage of stained cells. Twenty percent of apoptotic cells were observed 30 min after reperfusion.

  Conclusions We observed that 6 and 12 h of CIT were equivalent in terms of microscopic lung injury, inflammatory profile and apoptosis in a LT swine model. The extent of lung injury measured by microscopic lung injury score, proinflammatory cytokines and caspase-3 determination was mild.