Resumen de Formación de trampas extracelulares de neutrófilos humanos In vitro: descripción de un método

Lizet Jazmín Pérez Zapata, Ana María Trejos Ramírez, Andres Augusto Arias Sierra, Juan Álvaro López Quintero

• español

  Introducción: las trampas extracelulares de neutrófilo (NETs) son estructuras en forma de red compuestas de ADN y proteínas granulares que el neutrófilo libera al espacio extracelular en respuesta a diferentes estímulos. La NETosis es un mecanismo de muerte celular, que además cumple una función microbicida destruyendo o inhibiendo el crecimiento de microorganismos.

  Objetivo: describir el proceso para inducir, visualizar y cuantificar la formación de NETs en neutrófilos humanos.

  Métodos: se aislaron neutrófilos de sangre periférica de individuos sanos y se indujo la producción de NETs utilizando diferentes concentraciones de PMA a determinados tiempos. La liberación de ADN se cuantificó por espectrofluorimetría y se evaluó la morfología de las NETs utilizando microscopía de fluorescencia. Los análisis estadísticos se realizaron con los programas SPSS 17.02 y GraphPad Prism 6.

  Resultados y conclusiones: en el presente trabajo se describe un método que sirve para inducir NETs utilizando neutrófilos humanos, el cual es comparable con otros estudios descritos en la literatura. Los resultados y técnicas descritas aquí se pueden aplicar en ensayos que busquen evaluar el proceso de formación de NETs in vitro y tiene como intensión brindar herramientas metodológicas a los investigadores que deseen estudiar este proceso celular.

• English

  Introduction: Neutrophil Extracellular Traps (NET) are net-shaped structures, composed of DNA and granule proteins, which are released by neutrophil into the extracellular space in response to different stimuli. NETosis is described as a microbicide mechanism, which destroys microorganisms or inhibits their growing.

  Objective: To describe a process to induce, visualize and quantify the formation of NET in human neutrophils.

  Methodology: peripheral blood neutrophils were isolated from healthy individuals. NET production was induced using different concentrations of PMA at specific times. DNA release into the extracellular space was quantified by spectrofluorimetry and NET morphology was evaluated by fluorescence microscopy. Statistical analyzes were performed using SPSS and GraphPad Prism programs.

  Results and conclusions: this study describes a method used to induce NET in human neutrophils, which is comparable with other studies reported in the scientific literature. These results can be applied in essays that seek to evaluate NET formation in vitro and expect it will be helpful to researchers who wish to study this cellular process.