Resumen de Trascendencia del uso de una técnica de reacción en cadena de la polimerasa para la detección de Clostridioides difficile

Jerónimo Jaqueti Aroca, Laura Molina Esteban, I. García Arata, Jesús García Martínez, Isabel Cano De Torres, Santiago Prieto Menchero

• español

  Objetivos. Clostridioides difficile (CD) es la causa más frecuente de diarrea nosocomial. Se han propuesto algoritmos para mejorar el diagnóstico de la infección, basados en la realización de un método rápido que detecte glutamato deshidrogenasa (GDH) y/o toxinas A/B, seguido de una prueba confirmatoria (cultivo toxigénico, prueba de citotoxicidad, técnicas de biología molecular).

  Evaluamos un algoritmo diagnóstico para la detección de CD utilizando un test inmunocromatográfico y una prueba de reacción en cadena de la polimerasa (PCR).

  Material y métodos. Se realizaron dos pasos: 1) Un enzimoinmunoensayo rápido de membrana que detecta simultáneamente GDH y toxinas de CD (C.diff QUIK CHEK complete). Las muestras positivas frente a ambos se consideraron positivas; 2) A todas las muestras que fueron positivas sólo para GDH o toxina se les realizó un ensayo de PCR en tiempo real que detecta el gen de la toxina B (tcdB) (BD MAX Cdiff). Se consideraron positivas todas las muestras PCR positivas.

  Resultados. Se realizaron 2.138 determinaciones. 139 fueron positivas en GDH y toxinas, 148 sólo en GDH, y 12 sólo en toxinas. De las 160 dudosas, 117 fueron positivas por PCR (107/148 GDH+ y 10/12 toxinas+).

  Conclusiones. La PCR ha detectado 117 positivos más (un 73,1% de las muestras dudosas). Tradicionalmente los resultados toxinas+/GDH- se consideran falsos positivos. Creemos que la detección sumada de toxinas en el inmunoensayo y del gen tcdB en una misma muestra sería indicativa de su presencia real, y el resultado negativo de la GDH podría deberse a un falso negativo.

• English

  Objectives. Clostridioides difficile (CD) is the most common cause of nosocomial diarrhea. Detection of CD toxin in patients’ faecal samples is the traditional rapid method for the diagnosis of CD infection. Various testing algorithms have been proposed: an initial screening test using a rapid test, and a confirmatory test (cytotoxicity neutralization assay, toxigenic culture, nucleic acid amplification test) for discordant results. The aim of this study was to evaluate the effectiveness of a two-step algorithm using an immunochromatographic test followed of a polymerase chain reaction (PCR).

  Material and methods. The specimens have been tested according to the following schedule: 1) Step one: All samples were tested for detection of glutamate dehydrogenase antigen (GDH) and toxin A/B using the C. diff QUIK CHEK Complete test. All GDH and toxins positive results were considered CD positives; 2) Step two: When the results were discrepant (only GDH+ or toxins+), the samples were confirmed using the PCR test BD MAX Cdiff. All PCR positive results were considered CD positives.

  Results. A total of 2,138 specimens were initially tested.

  139 were positive for GDH and toxins. 160 discrepant results (148 GDH+ and 12 toxins+) were tested by PCR, 117 were positive (107/148 GDH+ and 10/12 toxins+).

  Conclusions. The implementation of a PCR method showed an increase de 117 positive results (73.1% of discrepant). Considering the sensitivity of C.diff QUIK CHEK (instructions of manufacturer), the GDH discrepant results may be false negatives, y the samples PCR and toxins positives may be real positives results.