Resumen de Estudio genético de 6 carcinomas renales cromófobos

Miguel Rodrigo Aliaga, A. Payá García, José María Millán Salvador, Miguel José Hernández Martí, Juan Fernando Jiménez Cruz

• español

  Objetivos Determinar el papel del gen Von Hippel-Lindau y p53 en la patogénesis del Carcinoma de Células Renales Cromófobas (CCRCr) y se analiza la frecuencia de pérdidas genéticas en los cromosomas 1, 2, 3p, 6, 10, 13, 17 y 21q.

  Material y método Se obtuvieron especímenes de tumor renal y riñón sano de 6 pacientes afectos de CCRCr directa- mente de las piezas de nefrectomía radical e inmediatamente fueron congeladas y almacenadas a -80ºC. Se practicó un análisis de PCR-SSCP para la identificación de mutaciones en p53 (exones 5-8) y en el gen VHL. Todos los casos positivos en el análisis de SSCP’s se caracterizaron posteriormente mediante secuenciación directa. La inactivación por metilación del gen VHL se buscó mediante Southern-blotting. Para investigar pérdidas específicas de diversos cromosomas se practicó análisis de microsatélites utilizando diversos marcadores localizados en ambos brazos de los cromosomas 1, 2, 6, 10, 13 y 17, así como en 3p y 21q.

  Resultados No se detectaron mutaciones ni inactivación por metilación del gen VHL en ningún tumor. La mutación del p53 se detectó en 2 (33%) de los 6 CCRCr, mostrando ambos tumores pérdida de heterocigosidad (LOH) en 17p. En 5 (83,3%) de los 6 CCRCr, el análisis de microsatélites mostró LOH en todos los marcadores informativos de todas las regiones excepto en 3p. Todos los casos mostraron retención de heterocigosidad en 3p.

  Conclusiones Las mutaciones de p53 en CCRCr son más frecuentes (33% en nuestra serie) que en los carcinomas con- vencionales o de células claras (< 2% en la mayoría de las series). A pesar de que el 65-75% de los carcinomas renales conven- cionales presenta mutaciones (60%) e inactivación por metilación (5-20%) del gen VHL, ningún CCRCr en nuestra serie mostró estas alteraciones. LOH en los cromosomas específicos testados (1, 2, 6, 10, 13, 17 y 21) confirman los hallazgos citogenéticos que caracterizan a los CCRCr. Nuestros resultados confirman que el CCRCr no es sólo un fenotipo histológico, sino también un genotipo distintivo de los otros carcinomas de células renales. La combinación específica de pérdidas cromosómicas permite un rápido y fácil diagnóstico de esta neoplasia con una simple técnica de microsatélites.

• English

  Objectives To determine the role of tumor suppressor genes p53 and von Hippel-Lindau (VHL), and the specific loss of chromosomes 1, 2, 3, 6, 10, 13, 17 and 21 in the pathogenesis of Chromophobe Renal Cell Carcinomas (CrRCC).

  Material and methods Renal tumor specimens and normal kidney tissue from 6 patients affected of CrRCC were obtained after radical nephrectomy and immediately snap-frozen. PCR-SSCP analysis for mutations of p53 (exons 5-8) and VHL genes was performed in all cases. All of the positive cases in SSCP analysis were further characterized by direct sequencing. Inactivation by VHL methylation were searched by Southern blot analysis. Microsatellite analysis using several markers covering both arms of chromosomes 1, 2, 6, 10, 13 and 17, as well as 3p and 21q, was performed to investigate specific loss of these chromosomes.

  Results Mutations of p53 were detected in 2 (33%) of the 6 CrRCCs, showing both tumors loss of heterocigosity (LOH) on 17p. VHL mutations and inactivation by methylation were not detected in any tumor. In 5 (83.3%) of the 6 CrRCCs, microsatellite analysis showed LOH at every informative marker on all the regions tested except 3p. Retention of heterozigosity on 3p was present in all cases.

  Conclusions Mutations of p53 in CrRCCs are more frequent (33% in our series) than in clear cell renal cell carcinomas (< 2% in most series). Despite 65-75% of clear cell RCCs show VHL mutations (60%) and inactivation by methylation (5-20%), no CrRCC in our series showed these alterations. LOH in the specific chromosomes tested (1, 2, 6, 10. 13, 17 and 21) confirm cytogenetic findings that characterize CrRCCs (specific combinations of multiple chromosomal losses). Our results, similar to those reported by other authors, confirm that CrRCC is not only a histologic fenotype, but also a distinctive genotype from other RCCs. The specific combination of chromosomal losses allows a quick and easy diagnostic of this kind of neoplasms with a simple technique of microsatellite analysis.