Resumen de Evaluación de la viabilidad de ovocitos bovinos mediante la utilización de3-(4-5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide

J. Calvo, V. Pérez, D. Fila, E. Campos

• español

  El objetivo de esta investigación fue evaluar la viabilidad de losComplejos Cúmulos Ovocitos (CCOs) bovinos mediante lautilización del 3-(4-5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl te-trazolium bromide (MTT).Se aspiraron folículos de 2-5 mm de diámetro de ovarios devacas sacrificadas en frigorífico y se seleccionaron los CCOsde acuerdo a las características del cúmulo (completo, parcial oausente) y del citoplasma del ovocito (uniforme, vacuolado oatigrado). Se clasificaron 512 CCOs como categoría A (cúmulocompleto y citoplasma uniforme), 503 como B (cúmulo in-completo y citoplasma uniforme) y 439 C ( ausente de cúmuloy citoplasma uniforme). Se incubaron en una solución de MTTa 37 °C, en atmósfera al 5% de CO2 y 99% de humedad durante4 horas. El MTT es incoloro o débilmente amarillento, atravie-sa la membrana celular y al ser reducido por enzimas deshi-drogenasas de las mitocondrias precipita en cristales de forma-zan de color azul intenso. La coloración fue considerada nega-tiva en los CCOs que no mostraron cambios y débil, moderadao intensa en los que presentaron un cambio de coloración condiferente intensidad. La mayoría de los CCOS A y B (buenacalidad) mostraron cambios de coloración, evidenciando unadestacada actividad enzimática, mientras que en el 23,1% deellos no se evidenciaron cambios. Aproximadamente el 45% delos CCOs C (menor calidad) la coloración no se modificó, cla-sificándose como negativos. La determinación de la calidad delos CCOs requiere de la incorporación de técnicas que ponganen evidencia aspectos de su estructura y función.

• English

  The purpose of the present work was to evaluate the viabilityof bovine Cumulus Oocyte Complex (COC), using 3-(4-5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolio bromide (MTT).The COC’s were obtained by aspirating 2-5mm follicles fromthe ovaries of cows at slaughter. The COCs were selectedaccording to the characteristics of the cumulus (complete,partial or absent) and the cytoplasm of the oocytes (uniformor vacuolated). The COCs were classified in three groups: 512(category A= complete cumulus and uniform cytoplasm), 503(category B= incomplete cumulus and uniform cytoplasm) and439 (category C= uniform cytoplasm and no cumulus). TheCOCs were incubated with MTT solution at 37°C, 5% CO2and 99% humidity during 4 hours. MTT is colorless or lightyellow and penetrates the cellular membrane, this solutionchanges to dark blue by the reduction of mitochondriadehydrogenises. The staining was negative when the COCs didnot show changes, and light, moderate or intense when theCOCs showed color changes with different intensity. Themajority of COCs in categories A & B (good quality) showedcolor changes, meaning that the enzymatic activity increased.Twenty three percent of A & B COCs showed negative staining.Approximately 45%. of COCs in C category (poor quality),showed no color change, being classified as negative. Todetermine the quality of the COCs it is necessary to usetechniques that show functional and structural characteristics