Estandarización y evaluación de dos pruebas de Reacción en Cadena de la Polimerasa para el diagnóstico de Salmonella enterica subespecie enterica en huevos

• CM Pérez ^[2] ; MM Sánchez ^[1] ; S Henao ^[2] ; NM Cardona-Castro ^[1]
  1. [1] Instituto Colombiano de Medicina Tropical

     Instituto Colombiano de Medicina Tropical

     Colombia

     
  2. [2] Universidad CES Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia
• Localización: Archivos de Medicina Veterinaria, ISSN 0301-732X, ISSN-e 0717-6201, Vol. 40, Nº. 3, 2008, págs. 235-242
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Standardization of two Polymerase Chain Reaction tests for the diagnosis of Salmonella enterica subspecie enterica in eggs
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  • español

    Salmonella infecta animales y humanos, siendo las aves de corral y sus derivados fuentes de transmisión; por lo tanto, la detección de Salmonella es importante para evitar infección. Los cultivos microbiológicos son usados para identificar la bacteria pero presentan limitaciones, por esto se han desarrollado alternativas moleculares como la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR), para detectar rápida y específicamente Salmonella. El objetivo de este trabajo fue estandarizar en huevos una PCR para el género Salmonella y una PCR múltiple para S. Enteritidis y S. Typhimurium. Se estudiaron 144 muestras de huevos: 36 lavados de cáscara externa, 36 de clara-yema, 36 clara-yema más agua peptonada y 36 lavados de cáscara interna. Adicionalmente, 24 muestras de clara-yema fueron infectadas independientemente con 4 serotipos de Salmonella. A todas las muestras se les realizó extracción de ADN, PCR para el gen hilA y PCR múltiple. Para el inóculo de 10(6) UFC/ml, la PCR para hilA mostró una sensibilidad de 70,83% y una especificidad de 100%. Para la PCR múltiple se obtuvo una sensibilidad de 75% y una especificidad de 98,4%. Ambas pruebas de PCR pueden detectar 0,27 µg/ml de ADN. Estas pruebas presentan gran potencial para detectar y controlar las salmonelosis transmitidas por huevos. Se requieren estudios adicionales para aumentar la sensibilidad y aplicarlas en el campo avícola e industria alimenticia.

  • English

    Salmonella enterica subspecie enterica is an important cause of zoonoses due to its capacity of infecting animals and humans. Poultry and its derivates are sources of transmission, therefore detection becomes an important control measure. Microbiological cultures are currently being used for this purpose but they have sensitivity limitations; molecular alternatives such as PCR allow for a fast and specific detection of Salmonella. The objective of this study was to standardize a PCR for Salmonella in egg samples and a multiplex PCR for Enteritidis and Typhimurium. One hundred and fourty four egg samples were studied: 36 shell wash, 36 yolk-albumen, 36 peptone water plus yolk-albumen, and 36 washes of internal shell. In addition, 24 yolk-albumen samples were infected with 4 different Salmonella serotypes. The DNA from the samples was tested for hilA and multiplex PCR. The PCR for hilA gene showed a sensitivity (S) of 70.83% and specificity (Sp) of 100%, a positive predictor value (PPV) of 100%, and a negative predictive value (NPV) of 96.3%. The multiplex PCR showed a S of 75% and a Sp of 98.4%, PPV of 75%, and NPV of 98.4%. Both PCR tests can detect 0.27 µg/ml of DNA. The results show a potential value of these tests for the detection and control of salmonellosis transmitted by eggs. Further studies are needed in order to improve the sensitivity of detection, so that both tests can be used in the poultry and food industry.