Resumen de Evaluación de tres protocolos para la extracción rápida de ARN total de tejidos de "Prosopis juliflora" (SW)

Claudia Yared Michel López, Daniel González Mendoza, Omar Zapata Pérez, Jorge Rubio-Piña, Lourdes Cervantes Díaz, Manuel de Jesús Bermúdez Guzmán

• español

  La extracción de ARN genómico de alta calidad para la amplificación por PCR, a partir de Prosopis spp., es complicada debido a la presencia de un alto porcentaje de metabolitos secundarios que se unen o coprecipitan con los ácidos nucleicos. En el presente estudio reportamos un protocolo modificado de sodio dodecil sulfato/fenol que incluye la eliminación de nitrógeno líquido en el proceso de maceración, β-mercaptoetanol en la extracción de tampón y paso de precipitación de etanol. Las proporciones de absorbancia A260/A280 del ARN aislado estaban en torno a 2 a 1.9, lo que sugiere que la fracción de ADN era pura y se puede usar para un análisis de PCR posterior. El ARN aislado por este protocolo es de calidad suficiente para aplicaciones moleculares; Esta técnica podría aplicarse a otros organismos que tienen sustancias similares que dificultan la extracción del ARN. Por último, esta propuesta representa una alternativa rápida, barata y eficaz para el aislamiento del ARN genómico de las hojas frescas de Prosopis spp., incluso en los laboratorios de baja tecnología.

  Palabras clave: ARN, extracción, mezquites, PCR

• English

  The extraction of high quality genomic RNA for PCR amplification, from Prosopisspp., is complicated due to the presence of a high percentage of secondary metabolites that bind or co-precipitate nucleic acids. In the present study,we report a modified protocol of sodium dodecyl sulfate/phenol that includes the elimination of liquid nitrogenin the maceration process, β-mercaptoethanol in the extraction of buffer and step of precipitation of ethanol. The absorbance ratios A260/A280of the isolated RNA were around 2 to 1.9, suggesting that the DNA fraction was pure and can be used for a subsequent PCR analysis. The RNA isolated by this protocol is of sufficient quality for molecular applications. This technique could be applied to other organisms that have similar substances that make it difficult to extract RNA. Finally, this proposal represents a fast, cheap and effective alternative for the isolation of genomic RNA from fresh leaves of Prosopisspp., even in low-tech laboratories.

  Keywords:extraction, mezquites, PCR,RNA