PCR cuantitativa en tiempo real para la amplificación de ADN de Burkholderia mallei: comparación con el método molecular recomendado por la OIE

• Autores: María Victoria Ortega García, O. Jiménez Mateo, J. Selles, Olga Bassy Álvarez, Carmen Granja Albarellos, Juan Carlos Cabria Ramos
• Localización: Sanidad militar: revista de sanidad de las Fuerzas Armadas de España, ISSN 1887-8571, Vol. 73, Nº. 2 (abr.-jun.), 2017, págs. 85-90
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Quantitative PCR in real time to Burkholderia mallei ADN amplification: A comparison with the molecular method recommended by OIE
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    Objetivo principal:

    Comparar dos PCRs en tiempo real cuantitativas para la identificación de Burkholderia mallei, en términos de sensibilidad y especificidad analíticas.

    Metodología:

    Amplificación parcial de genes de B. mallei:- orf11 y orf13 del sistema de secreción de tipo III TTS1 del género Burkholderia mediante qPCR con sondas de hibridación. - fliP que codifica para la flagelina P de B. mallei mediante qPCR con sonda TaqMan. Cálculo de parámetros de validez.

    Resultados:

    El ensayo desarrollado en el laboratorio obtuvo un límite de detección del orden del obtenido con el método recomendado por la OIE (70,4 fg/reacción) y permitió la amplificación específica de ADN de B. mallei.

    Conclusión:

    El método desarrollado por el laboratorio de Biología Molecular del INTA permite una rápida amplificación de ADN de B.mallei con unas elevadas sensibilidad y especificidad analíticas. Además, posibilita la diferenciación entre B. mallei y B. pseudomallei.

  • English

    Objective:

    Comparison of two quantitative real-time PCRs for identification of Burkholderia mallei, on analytical sensitivity and specificity terms.

    Methods:

    Partial amplification of Burkholderia mallei gene: - orf11 and orf13 targeting the type III secretion TTS1 system cluster from Burkholderia genus by qPCR using hybridisation probes. - fliP targeting flagelin P from B. mallei by qPCR using TaqMan probe.Validity parameters determination.

    Results:

    The duplex assay developed by the Molecular Biology Laboratory at INTA obtained a limit of detection similar than that reached by the molecular method recommended by the OIE and permitted the specific amplification of B. mallei DNA.

    Conclusions:

    The duplex assay developed by the Molecular Biology Laboratory at INTA provides a rapid amplification of B. mallei DNA, also shows high analytical sensitivity and specificity. Furthermore, this assay permits the differentiation between B. mallei and B. pseudomallei.