Un método nuevo para aislar e identificar directamente mutantes nit- en Escherichia coli K12

• Mariemma Ortega de López ^[1]
  1. [1] Universidad de Los Andes.
• Localización: MedULA: revista de la Facultad de Medicina, ISSN-e 0798-3166, Vol. 8, Nº. 1-4, 1999
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • A new method for the direct isolation and identification of nit-mutants in Escherichia coli K12
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• Resumen
  • español

    Los métodos para aislar e identificar mutantes defectivos en la respiración anaeróbica del nitrato (Nit-) tienden a ser más específicos para ciertos genes mutados. En el presente trabajo se desarrolló un método denominado TNC, basado en una modificación del publicado por Fimmel y Haddock (1979), pero con mayores ventajas: no fue necesario incubar en anaerobiosis estricta, permitió ampliar el espectro de genes mutados (incluyendo mol y fnr ) y detectar la aparición de colonias rojas muy rápidamente, en sólo 24 horas de crecimiento. La frecuencia de mutantes Nit- y la distribución de genes mutados fueron superiores, al usarlo comparativament e con el método de selección por resistencia al clorato.

    El TNC resultó muy sensible y con reproducibilidad para id entificar diferencialmente clones mutantes Nit- (TNC+) y silvestres Nit+ (TNC-); además fue eficiente para caract erizar cepas bacterianas y en los análisis genéticos. En el presente trabajo también se estableció y evaluó un criterio de clasificación fisiológica para agrupar preliminarmente a los mutantes pleiotrópicos Nit- Gas- en cuatro subclases genotípicas, al observar que las mutaciones en moe revertían fenotípicamente con molibdato, en forma tardía.

  • English

    The methods to isolate and to identify defective mutants in the nitrate anaerobic respiration (Nit-) tend to be preferential for certain mutated genes. This work presents a method denominated TNC, based in a modification of Fimmel and Haddock published in1979, but with highest advantages: it was not necessary to incubate with strict anaerobiosis, permitted both to amplify the spectre of mutated genes (including mol y fnr ) and to detect very quickly the appearing red colonies, in only 24 hours of growth. Using it comparatively with the method of selection for chlorate resistance, the frequency of Nit- mutants and the distribution of genes mutated were higher. The TNC showed to be very sensitive and with reproducibility to identify differently Nit- mutants (TNC+) and Nit+ wild type (TNC-) clones; furthermore, it was efficient for the characterisation of bacteria strains and the genetic analysis. In the present work it was also established and evaluated a criteria of physiologic classification for preliminary grouping pleiotropic Nit- Gas- mutants in four genotypic subclass, by observing that moe mutations could be reverted phenotypically in late form with molybdate.