Monitorización terapéutica de metotrexato en pacientes leucémicos mediante cromatografía líquida de alta resolución: desarrollo, validación y aplicación clínica del método analítico

• Autores: Lucía Torregiani, Yamile Soledad Caro, María Mercedes de Zan
• Localización: Revista del laboratorio clínico, ISSN-e 1888-4008, Vol. 11, Nº. 2, 2018, págs. 64-72
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Therapeutic monitoring of methotrexate in leukaemia patients using high performance liquid chromatography: development, validation and clinical application of the analytical method
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• Resumen
  • español

    Introducción La monitorización terapéutica de metotrexato (MTX) es una práctica indicada en el seguimiento del tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda para ajustar las dosis de rescate con leucovorina y evitar toxicidad. El objetivo de nuestro trabajo fue evaluar el desempeño de un método bioanalítico por cromatografía líquida en el control de tratamientos pediátricos de leucemia linfoblástica aguda.

    Materiales y métodos Se analizó la evolución de la concentración plasmática del fármaco en 61 pacientes, divididos en 2 grupos según el tipo de tratamiento con MTX: infusión de 24 h e infusión de 36 h. Alícuotas de 250 μL de plasma pretratado se analizaron utilizando un método analítico validado, en un cromatógrafo Agilent 1260 con una columna Zorbax Eclipse XDB-C18 (4,6 × 150 mm, 5 μm) y fase móvil compuesta por acetonitrilo y solución reguladora de acetato de sodio 0,05 mol/L a pH 3,5. La detección se efectuó a 305 nm.

    Resultados El método no presentó interferencias por metabolitos ni otros fármacos. El límite inferior de cuantificación fue de 0,05 μmol/L, la precisión y la exactitud inter e intraensayo fueron aceptables en el rango (0,05-5,0 μmol/L), verificándose un comportamiento lineal. El 29,4% de los pacientes con infusión de 24 h y el 60% de aquellos con infusión de 36 h presentaron niveles plasmáticos tóxicos de MTX, por lo que debieron adelantarse y/o reforzarse los rescates con leucovorina.

    Conclusiones El método cromatográfico resultó eficiente y accesible para la monitorización terapéutica de MTX en pacientes pediátricos, permitiendo la toma de decisiones médicas pertinentes en un corto tiempo de análisis.

  • English

    Introduction Therapeutic drug monitoring of methotrexate (MTX) is a practice used during acute lymphoblastic leukaemias treatments in order to adjust the leucovorin rescue dose and avoid toxicity. The aim of this work was to evaluate the performance of a bioanalytical method based on liquid chromatography in the control of paediatric acute lymphoblastic leukaemia treatments.

    Materials and methods MTX plasma concentrations were evaluated in a total of 61 patients, divided in 2 groups according to the treatment: 24 h infusion and 36 h infusion. The method used 250 μL aliquots of pre-processed plasma, using a validated analytical method, in an Agilent 1260 chromatograph with a 5 μm Zorbax Eclipse XDB-C18 column (4.6 × 150 mm) and a mobile phase composed of acetonitrile and 0.05 mol/L of a sodium acetate buffer solution at pH 3.5. The detection was performed at 305 nm.

    Results The method did not show interferences by metabolites or other drugs. The lower limit of quantitation was 0.05 μmol/L. Inter- and intra-assay precision and accuracy were acceptable in the working range (0.05-5.0 μmol/L), and linear behaviour was observed. Toxic plasma levels of MTX were observed in 29.4% and 60% of the patients from 24 h infusion and 36 h infusion, respectively. Therefore, leucovorin rescue treatment was either applied earlier or reinforced.

    Conclusions The chromatography method was efficient and accessible for the therapeutic drug monitoring of MTX in paediatric patients, allowing appropriate medical decision making within a short time of analysis.