Resumen de PCR en tiempo real para el sexaje y análisis citológico de la sinapsis del bivalente más pequeño en espermatocitos en paquiteno de Oreochromis niloticus

Zulita Prieto, Monica Arqueros, Linda Sánchez Tuesta, David Salirrosas

• español

  El objetivo de la presente investigación fue dar a conocer nuevos marcadores moleculares para la PCR en tiempo real asociados a los cromosomas sexuales y el análisis de la sinapsis del bivalente más pequeño en espermatocitos en paquiteno de Oreochromis niloticus. Se diseñaron cuatro pares de cebadores y se pusieron a prueba por PCR punto final y por PCR en tiempo real utilizando el fluorescente SYBR® Green en muestras de ADN de hembras XX, machos XY y supermachos YY. Los tamaños de los fragmentos amplificados por PCR punto final fueron concordantes a los valores esperados y por PCR en tiempo real se demostró igual especificidad pero con ventaja en rapidez en la detección de amplificación de marcadores asociados a los cromosoma X y Y, de acuerdo con las condiciones de la PCR establecidas. Las diferencias genéticas entre las regiones de los cromosomas X y Y demostradas con los marcadores específicos no fueron perceptibles citológicamente en los espermatocitos en paquiteno de O. niloticus XY. En base a las diferencias y homologías de las secuencias de ADN entre las accesiones KC710223 y KC710224 de los cromosomas X y Y se propone un modelo de sinapsis del bivalente XY.

• English

  The aim of the present study was to report new molecular markers for real-time PCR associated with X and Y sex chromosomes, and perform analysis of the synapsis of the smallest bivalent in pachytene spermatocytes of XY male Oreochromis niloticus. Four pairs of primers were designed and were tested by endpoint PCR and real-time PCR using SYBR Green detection system in DNA samples from XX females, XY males and YY supermales. In order to assess the smallest bivalent synapsis, testicular samples from XY males were used to make chromosomal spreads in pachytene. Size range of fragments amplified by endpoint PCR was concordant with the expected values. Real-time PCR assay showed equal specificity but speed advantage in amplification detection of markers associated with X and Y chromosomes according to the established PCR conditions. Genetic differences between regions of the X and Y chromosomes (smallest bivalent) proven with specific markers were not cytological perceptible in pachytene spermatocytes from XY O. niloticus. A model of XY bivalent synapse was suggested based on the DNA sequences homologies and differences between KC710223 and KC710224 accessions from X and Y chromosomes.