Santiago de Compostela, España
Objetivo:analizar el microbioma subgingival asociado a la periodontitis crónica mediante la pirosecuenciación del gen ARN ribosomal 16S.
Material y método: el grupo de estudio estuvo formado por 50 pacientes, 20 con salud periodontal (G-Control) y 30 con periodontitis crónica generalizada (G-Perio). De todos los pacientes se obtuvieron muestras subgingivales mediante puntas de papel autoclavadas, el ADN de las cuales se analizó mediante pirosecuenciación de los productos de PCR del gen ARNr 16S. La diversidad bacteriana se determinó mediante las curvas de rarefacción, índices de diversidad y análisis de Coordenadas Principales. La asignación taxonómica de las secuencias obtenidas se efectuó con el “Ribosomal Database Project classifier”.
Resultados: en el total de las muestras analizadas, se identificaron 94 géneros bacterianos y 202 especies bacterianas (de 41 géneros de interés). Las curvas de rarefacción e índices mostraron un mayor número de especies en las muestras del G-Perio. En el G-Perio se obtuvieron porcentajes de abundancia significativamente superiores para Porphyromonas, Tannerella, Treponema, Filifactor, Peptostreptococcus, Eubacterium, Desulfobulbus, Hallella, Bulleidia, Phocaeicola y Mogibacterium; y porcentajes significativamente inferiores para Fusobacterium, Streptococcus, Leptotrichia, Capnocytophaga, Corynebacterium, Veillonella, Neisseria, Actinomyces y Johnsonella. Se detectaron diferencias significativas en el porcentaje de abundancia de 30 especies bacterianas entre ambos grupos de estudio. Hubo 14 géneros y 25 especies bacterianas que mostraron correlaciones significativas con los parámetros clínicos que definen la condición periodontal (profundidad de sondaje, pérdida de inserción clínica y/o sangrado al sondaje).
Conclusiones:la pirosecuenciación del gen ARNr 16S reveló una mayor diversidad y diferente estructura-composición de la microbiota subgingival en la periodontitis crónica. Los organismos periodontopatógenos, aunque en bajas proporciones, también se encontraron en individuos sanos, por lo que esta patología no se puede considerar como una enfermedad infecciosa en el sentido clásico del término. Se corroboró, por el contrario, que esta enfermedad está asociada a una disbiosis polimicrobiana, caracterizada no solo por una mayor implicación de patobiontes “establecidos”, sino también por la coexistencia de otros patobiontes con papel desconocido, como Filifactor alocis.
Aim:to analyze the subgingival microbiota associated with chronic periodontitis by pyrosequencing of 16 S rRNA gene.
Material and methods:the study group consisted of 50 patients, 20 with periodontal health (Control) and 30 with generalized chronic periodontitis (Perio). Patients subgingival samples were obtained by autoclaved paper points, DNA from which was analyzed by pyrosequencing of PCR products of 16 S rRNA gene. Bacterial diversity was determined by rarefaction curves, diversity indexes and principal coordinates analysis. The taxonomic assignment of sequences obtained was performed with the "Ribosomal Database Project classifier".
Results: in the total samples analyzed, 94 bacterial genera and 202 bacterial species (from 41 genera of interest) were identified. Rarefaction curves and indexes showed a greater number of species in the samples of Perio group. In the Perio group were obtained significantly higher abundance percentages for Porphyromonas, Tannerella, Treponema, Filifactor, Peptostreptococcus, Eubacterium, Desulfobulbus, Hallella, Bulleidia, Phocaeicola and Mogibacterium; and significantly lower percentages for Fusobacterium, Streptococcus, Leptotrichia, Capnocytophaga, Corynebacterium,Veillonella, Neisseria, ActinomycesandJohnsonella. Significant differences were detected in the percentage of 30 bacterial species abundance between both study groups. There were 14 genera and 25 bacterial species which showed significant correlations with clinical parameters associated with periodontal status (probing depth, clinical attachment loss and/or bleeding on probing).
Conclusions:pyrosequencing 16 S rRNA gene revealed greater diversity and different structure-composition of the subgingival microbiota in chronic periodontitis. Periodontopathic organisms were found at low proportions in healthy individuals, supporting that this pathology cannot be considered an infectious disease in classical terms. On the contrary, the disease is associated with polymicrobial dysbiosis, which is characterized not only by greater involvement of "established" pathobionts, but also by the coexistence of other pathobionts of unknown role, such as Filifactor alocis.
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