Expresión de anticuerpos de cadena sencilla (ScFv) contra Helicobacter pylori en la levadura Pichia pastoris

• Myrna D. Alonso-Ochoa ^[1] ; Oscar Zavala-Tapia ^[1] ; César Pedroza-Roldán ^[1]
  1. [1] Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

     Universidad Autónoma de Ciudad Juárez

     México

     
• Localización: Revista Biomédica, ISSN-e 2007-8447, ISSN 0188-493X, Vol. 18, Nº. 3, 2007
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Expression of single chain antibody fragments (ScFv) against Helicobacter pylori in the yeast Pichia pastoris
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• Resumen
  • español

    Helicobacter pylori es uno de los agentes causales mas importantes de enfermedades gástricas alrededor del mundo, la detección oportuna de la bacteria evitaría el desarrollo de gastritis y en algunos casos cáncer gástrico. El uso de anticuerpos específicos contra la bacteria permite la detección de ésta en la población microbiana de muestras; desafortunadamente la inducción de estos anticuerpos en vectores bacterianos reduce la eficiencia de la expresión.

    La levadura metanotrófica Pichia pastoris permite la expresión de grandes cantidades de proteína recombinante con alta calidad, este sistema puede ser utilizado para la expresión de fragmentos de anticuerpos de cadena sencilla específicos a H.

    pylori para el desarrollo de inmunodiagnósticos.

    Material y métodos. Identificación de monoclonales reactivos contra H. pylori cepas ATCC 49396, N2 y J99 a partir de una biblioteca ScFv, caracterización de las clonas seleccionadas y subclonación del gen que codifica para dichos fragmentos de anticuerpo en un vector de expresión de la levadura Pichia pastoris. Inducción y cuantificación de la expresión de anticuerpo.

    Resultados y discusión. De 96 clonas posibles se seleccionaron 10 con la mejor reactividad y especificidad contra H. pylori, de éstas se seleccionó la clona 9D para aislar el ScFv y clonarlo en el vector de expresión de la levadura.

    Los ensayos de cuantificación de expresión mostraron altos rendimientos llegándose a obtener 50 µg/ml de proteína recombinante a las 72 horas de inducción.

  • English

    Helicobacter pylori is one of the most important causal agents of gastric diseases around the world, the opportune detection of the bacterium would avoid the development of gastritis and in some cases gastric cancer. The use of speci- fic antibodies against H. pylori allows the detection of this pathogen in the microbial population of samples; unfortunately the expression of antibodies in some bacterial vectors reduces the efficient expression of high amount of functional protein.

    The yeast Pichia pastoris allows the expression of great amounts of recombinant protein with high quality; this system can be used for the expression of single chain antibodies against H. pylori for the development of immunodiagnostics.

    Material and methods. Identification of reactive clones against H. pylori strains ATCC 49396, N2 and J99 isolated from a ScFv library, characterization of selected clones and isolation of the ScFv gene coding for the fragment of antibody, and construction of the ScFv in the expression vector Pichia pastoris. Induction and quantification of expression of the antibody.

    Results and discussion. Ninety six clones were isolated and only 10 clones with the best reactivity and specificity against H. pylori were selected.

    From these 10 clones we isolate the ScFv from the clone 9D to express its ScFv in the yeast expression vector. The quantification tests showed high levels of protein expression (50 µg/ml) of the recombinant protein at the 72 hours of induction