La pintura de las "Santas Justa y Rufina" (1665-66) realizada por mano del pintor sevillano Bartolomé Esteban Murillo (1617-82) es una de sus más destacadas imágenes femeninas, en la que se retratan las dos santas mártires. Este cuadro, conservado actualmente en el Museo de Bellas Artes de Sevilla, perteneció originalmente al retablo mayor de la Iglesia de los Capuchinos de la ciudad y estaba situado a la izquierda de su primer cuerpo, formando pareja con el de los "Santos Leandro y Buenaventura" (1665-66, Sevilla, Museo de Bellas Artes), que figuraba a la derecha.
Hasta el presente se ha considerado que la conmemoración del martirio de las santas hermanas en el retablo estaba plenamente justificada porque la iglesia capuchina se construyó donde había muerto Santa Rufina en defensa de su fe. En la pintura, por otra parte, a través de algunas consideraciones sobre la veneración e imágenes pictóricas de las vírgenes en la ciudad de los siglos XVI y XVII, observamos que los dos personajes aparecen destacando una pequeña reproducción de la Torre de la Giralda. Esto, por un lado, supone un recordatorio del milagro sucedido en el año 1504 que les promovió definitivamente a patronas sevillanas y, por otro, muestra su patronazgo de la ciudad del Guadalquivir.
A continuación, los "Santos Leandro y Buenaventura" expresan la cesión de la iglesia por parte del arzobispado sevillano a la orden capuchina, representada en forma de una conversación imaginaria entre el arzobispo San Leandro y el franciscano San Buenaventura. Así, mediante esta pareja de cuadros los capuchinos sevillanos recién llegados a la ciudad conmemoraban orgullosamente el hecho de que hubieran entrado en la sociedad religiosa sevillana recibiendo la antigua ermita de las Santas Justa y Rufina, uno de los más importantes santuarios ciudadanos. Esto es, las "Santas Justa y Rufina" y los "Santos Leandro y Buenaventura" alababan juntos la santidad de la ciudad de las vírgenes y la fundación del convento capuchino en Sevilla.
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