Resumen de Una asignatura pendiente: la normalización de la RT-qPCR

Rafael A. Cañas Pendon, María Belén Pascual Moreno, Fernando de la Torre

• español

  En los últimos años, la biología molecular ha pasado por una serie de revoluciones técnicas. La RT- qPCR es una técnica con un papel principal en una de estas revoluciones. Desde su aparición, los análisis de expresión génica se han vuelto cuantitativos, más baratos y más rápidos, por lo que son más populares en la comunidad científica, difundiendo su uso por todos los laboratorios. Sin embargo, la técnica no es tan sencilla como la mayoría de los investigadores piensan. La incorrecta implementación de la RT-qPCR con- duce a resultados inconsistentes e irrepetibles. Sin embargo, incluso en este momento, hay investigadores haciendo esfuerzos para reorientar esta situación estableciendo una serie de directrices como en el caso de las normas MIQE. Uno de los temas más problemáticos es la estimación de la expresión génica mediante la normalización de los resultados crudos de RT-qPCR. Por lo general, casi todos los investigadores con- sideran que la normalización se debe realizar utilizando genes de referencia con expresión estable en cada condición o tejido, los denominados genes «constitutivos». Sin embargo, este concepto ha sido superado por la experiencia que muestra que la selección de los genes de normalización debe lograrse a través de procedimientos experimentales siguiendo un «código de buena conducta» como las directrices MIQE

• English

  In recent years, the molecular biology has gone through a series of technical revolutions. The RT-qPCR is a technique with a leading role in one of these revolutions. Since its emergence, the gene expression analyses have become quantitative, cheaper and faster, thus more popular in the researchers’ community spreading its use across all the laboratories. However, the technique is not as easy as the most of researchers think.

  The incorrect implementation of the RT-qPCR leads to inconsistent and unrepeatable results. Nevertheless, even at this point, there are researchers making efforts to redirect this situation stablishing a series of guidelines as in the case of MIQE standards. One of the most problematic issues is the estimation of the gene expression normalizing the raw results from a RT-qPCR. Usually, almost every researcher consider that the normalization must be performed using reference genes with stable expression in every condition or tissue, so-called “housekeeping” genes. However, this concept has been overcome by the experience showing that the selection of the normalization genes must be achieved through experimental procedures following a “code of good conduct” such as the MIQE guidelines.