Resumen de Influencia del tipo de tratamiento de la pulpa durante el aislamiento en la obtención de células madre de pulpa dental humanas
José Viña Almunia, Consuelo Borrás Blasco, Juan Gambini Ricapa, Marya El Alami, Miguel Peñarrocha Diago, José Viña Ribes
Objetivo: Estudiar el efecto del tipo de tratamiento de la pulpa durante el aislamiento, con unas condiciones de O2 del 3%, en el tiempo y la eficacia de obtención de células madre de pulpa dental (CMPD).
Material y método: Se utilizaron 120 pulpas dentales para aislar CMPD tratando el tejido pulpar durante el aislamiento mediante 9 métodos distintos, utilizando agentes digestivos, disgregantes, mecánicos o combinándolos. Las células fueron positivas para los marcadores CD133, Oct4, Nestin, Stro-1, CD34 y negativas para el marcador de células hematopoyéticas CD45, confirmando de esta manera la presencia de células madre mesenquimales. Se analizó la eficacia de obtención de CMPD y el tiempo mínimo necesario para obtener las células comparando los 9 métodos.
Resultados: Se aislaron CMPD de 97 de las 120 pulpas utilizadas para el estudio, con lo que el porcentaje total de obtención de CMPD fue del 80,8%. Se obtuvieron CMPD con todos los métodos utilizados menos con fragmentación mecánica de la pulpa, en el que no se realizó digestión enzimática de esta. El tiempo mínimo para aislar CMPD fue de 8 horas, realizando la digestión con 2mg/ml EDTA durante 10 minutos, 4mg/ml de colagenasa tipo I, 4mg/ml de dispasa tipo II durante 40 minutos, 13ng/ml de termolisina durante 40 minutos y sonicando el cultivo durante un minuto.
Conclusión: De una serie de 120 pulpas dentales se aislaron CMPD de 97. Tras comparar 9 tratamientos de la pulpa durante el aislamiento, el tiempo mínimo para aislar CMPD fue 8 horas. Al combinar agentes enzimáticos, disgregantes y mecánicos se consiguió acortar al máximo el tiempo de obtención de CMPD sin comprometer la obtención de células.
