Serological and molecular tools for strain discrimination of Citrus tristeza virus isolates from Nuevo Leon, Mexico

• Autores: M. Magdalena Iracheta Cárdenas, Isidro H. Almeyda León, Bayarm Cevik, Charles L. Niblett, Richard F. Lee, Mario A. Rocha Peña
• Localización: Agrociencia, ISSN 2521-9766, ISSN-e 1405-3195, Vol. 44, Nº. 4, 2010, págs. 449-460
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Herramientas serológicas y moleculares para la discriminación de aislamientos del virus tristeza de los cítricos del Estado de Nuevo León, México
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  • español

    El virus de la tristeza (Citrus tristeza virus = CTV) es un problema de importancia para la industria citrícola mexicana. Se han reportado plantas infectadas por el CTV en 20 estados productores de cítricos del país, en forma de infecciones asintomáticas, incluso en plantas injertadas en el patrón hipersensible naranjo agrio. La detección de aislamientos severos de CTV es necesaria para reforzar la operación de la campaña de CTV en todo el país. En el presente estudio se caracterizaron 13 aislamientos del CTV del estado de Nuevo León y uno del estado de Tamaulipas por su actividad contra el anticuerpo monoclonal MCA13, PCR bi-direccional (BD) e hibridación con sondas específicas para el gen p25 de la proteína de cápside. Diez de 13 aislamientos del CTV de Nuevo León y el aislamiento de Tamaulipas dieron una reacción positiva al anticuerpo monoclonal MCA 13. Las pruebas BD-PCR dieron un fragmento de ADNc de 300 pares de bases característico de razas tipo decaimiento en ocho de los 13 aislamientos de Nuevo León y del aislamiento de Tamaulipas. En la hibridación con sondas ADN específicas, dieron reacción con ocho aislamientos (CTV) con la Sonda II asociada con linajes CTV del tipo decaimiento y tres aislamientos mostraron reactividad con la Sonda VII asociada con linajes de tipo débil. Como conclusión, se mostró la utilidad del anticuerpo monoclonal MCA13, del PCR bi-direccional y de la hibridación con sondas específicas de (SGSP) para la discriminación de aislamientos de CTV, así como el descubrimiento de aislamientos severos de CTV en el estado de Nuevo León. Tanto el PCR-BD y la hibridación con sondas específicas (SGSP) fueron más adecuados para la discriminación de la aislamientos de CTV, que el anticuerpo monoclonal MCA13. El PCR-BD pudo detectar mezclas de aislamientos débiles y del tipo decaimiento del CTV en una misma muestra; la hibridación con SGSP fue adecuada para detectar aislamientos CTV ya sea de tipo débil, tipo decaimiento y picado de tallo.

  • English

    Citrus tristeza virus (CTV) is an important issue to the Mexican citrus industry. CTV infected plants have been reported in 20 citrus producing states of the country as symptomless virus infections, even on plants grafted on the sensitive sour orange rootstock. The detection of severe CTV isolates is mandatory to reinforce the operation of the CTV campaign nationwide. In this study, 13 CTV isolates from Nuevo León and one from Tamaulipas states were characterized for activity against the strain discriminatory MCA13 monoclonal antibody, bi-directional (BD) PCR, and hybridization with specific DNA probes, with RT-PCR amplicons, of the p25 coat protein gene. Ten out of 13 CTV isolates from Nuevo León and the Tamaulipas isolate gave a positive reaction to the MCA13 monoclonal antibody. BD-PCR tests yielded a cDNA fragment of 300 bp characteristic of decline-inducing CTV strains with eight of 13 isolates from Nuevo León and the Tamaulipas isolate. Hybridization with strain group specific DNA probes showed reactivity of eight CTV isolates with Probe II associated with decline inducing CTV strains, and three CTV isolates with Probe VII, associated to mild CTV strains. As a conclusion, it was shown the usefulness of the MCA13 monoclonal antibodies, BD-PCR and the hybridization with strain group specific DNA probes (SGSP) for the discrimination of CTV isolates, and the discovering of severe CTV isolates in the state of Nuevo León. Both BD-PCR and hybridization with SGSP were more suitable for strain discrimination of CTV isolates, than the MCA13 monoclonal antibody. BD-PCR was able to detect mixtures of both mild and decline inducing CTV isolates in the sample; hybridization with SGSP was suitable for detecting either mild, decline inducing and stem pitting CTV isolates.