Adaptación de la técnica rt-pcr para el diagnóstico del virus del amarillamiento de las venas de papa en venezuela

• Osorio, Martha E. ^[1] ; Marques, Alexis F. ^[1] ; Romay, Gustavo J. ^[2] ; Roa, Sara E. ^[1] ; Demey, Jhonny R. ^[2] ; Vegas, Ariadne L. ^[1]
  1. [1] Instituto Nacional de Investigaciones Agrícolas (INIA). Maracay. Venezuela
  2. [2] Instituto de Estudios Avanzados (IDEA). Sartenejas, Baruta, Caracas. Venezuela
• Localización: Bioagro, ISSN 1316-3361, ISSN-e 2521-9693, Vol. 28, Nº. 1, 2016, págs. 47-52
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Adaptation of RT-PCR technique for the diagnosis of potato yellow vein virus in Venezuela
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• Resumen
  • español

    El virus del amarillamiento de las venas de papa (PYVV) pertenece al género Crinivirus, familia Closteroviridae y es transmitido por la mosca blanca de los invernaderos (Trialeurodes vaporariorum). Es un problema importante para los países andinos debido a que ocasiona pérdidas en la producción, al causar reducción del número y tamaño de los tubérculos. Su diagnóstico, basado en la expresión de síntomas, es impreciso porque el virus puede infectar en forma asintomática a las plantas y el diagnóstico serológico se dificulta por la inexistencia de pruebas comerciales disponibles. El objetivo de este trabajo fue la adaptación de la técnica RT-PCR para el diagnóstico y posterior rastreo viral del PYVV en las zonas productoras de Venezuela. Se colectaron 10 muestras sintomáticas en los estados Táchira y Trujillo. La extracción del ARN se realizó utilizando el kit RNeasy Plant Mini (Qiagen), y se incorporó al proceso la ultracongelación del tejido (-60 °C) y adición de metabisulfito de sodio (0,05 mg·g -1 ). La retrotranscripción se ejecutó mediante el kit ImPron-II Reverse-Transcription System (Promega). En la RT-PCR se utilizaron iniciadores específicos para los genes de CP y CPm, probándose diferentes temperaturas de hibridación y extensión, así como varias mezclas de amplificación. La adaptación realizada a la RT-PCR permitió la amplificación de fragmentos específicos, con los cuales se confirmó la infección del virus en el 100 % de las muestras. Se demuestra por primera vez su presencia en Venezuela basados en técnicas moleculares. Estos resultados aportan un referencial tecnológico de diagnóstico que puede ser implementado para prevenir la dispersión del virus a partir del tubérculo-semilla.

  • English

    Potato yellow vein virus (PYVV) belongs to the genus Crinivirus, family Closteroviridae, and is transmitted by the greenhouse whitefly (Trialeurodes vaporariorum). It is an important problem for Andean countries because it causes loss of production by reducing the number and size of tubers. The diagnosis based on symptom expression is inaccurate because it can infect plants asymptomatically, and serological diagnosis is hampered by the lack of commercial kits available in the country. The objective of this study was the adaptation of the RT-PCR technique for the PYVV diagnosis and subsequent viral tracking in producing areas.

    Ten symptomatic samples were collected in Táchira and Trujillo States, Venezuela. RNA extraction was performed using the RNeasy Plant Mini kit (Qiagen). Deep freezing of the tissue (-60 °C) and addition of sodium metabisulfite (0,05 mg·g -1 ) were incorporated as additional steps. The retrotranscripción was executed by using the kit ImPron-II Reverse-Transcription System (Promega). Specific primers to amplify CP and CPm genes were utilized, as well as different anneling and extension temperatures, and various amplification mixtures. Such adaptations allowed the amplification of specific fragments, and confirmed virus infection in 100 % of the samples. It is the first time that PYVV is diagnosed by molecular techniques in Venezuela, thus it represents a diagnostic procedure that can be implemented to prevent the spread of the virus from seed tuber.