Resumen de Detección del Prunus necrotic ringspot virus en durazno (Prunus persica (L.) en México y caracterización molecular de su componente ARN-3

Rodolfo de la Torre Almaráz, Jesús A. Sánchez Navarro, Vicente Pallás Benet

• español

  Durante recorridos realizados de 2008 a 2012 en huertas comerciales de durazno en el Estado de México, estados de Morelos y Puebla, se observaron daños foliares de moteado amarillo, anillos cloróticos, patrones lineales y mosaico. Se transmitió mecánicamente un virus de macerados de hojas de durazno con daños de moteado amarillo, a plántulas de varias especies de tabaco causando manchas blanquecinas. En diagnósticos serológicos (DAS-ELISA) y de hibridación tipo dot-bot, utilizando ribosondas marcadas con digoxigenina, para la detección de seis virus que infectan al durazno, se detectó sólo al virus Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV. Ilarvirus) en las muestras recolectadas con síntomas. El análisis electroforético de ARN-dc de origen viral, obtenido de follaje con síntomas, mostró tres bandas de 3.6, 2.5 y 1.8 Kpb de peso molecular, correspondientes al genoma del PNRSV. En todas las localidades se verificaron infecciones por PNRSV en plantas de durazno por secuenciación directa de productos de la RT-PCR, utilizando como moldes extractos de ARN-dc viral y oligonucleótidos específicos que amplifican un fragmento del gen de la proteína de la cápside de 455 pb de este virus. La identidad del PNRSV se confirmó mediante la clonación y determinación de la estructura primaria del ARN-3 del virus, que contiene los marcos de lectura abierta correspondientes a la proteína de movimiento (MP) y de la cápside (CP). La comparación de la secuencia de nucleótidos y de aminoácidos correspondientes al ARN-3 del PNRSV, con secuencias disponibles en la base de datos, mostró una identidad del 98 % y 100 %, respectivamente. Análisis filogenéticos agruparon los tres aislados caracterizados dentro de los grupos PE5-III y PV32-I. En conjunto, los datos presentados indican que las variantes de PNRSV caracterizadas en México, no difieren del resto de aislados previamente conocidos, señalando un probable origen común.

• English

  During field observations from 2008 to 2012 in commercial peach orchards in the Estado de Mexico, states of Morelos and Puebla, leaf damage was observed in the form of yellow mottle, chlorotic rings, linear patterns and mosaic. A virus was transmitted mechanically with affected macerated peach leaves exhibiting yellow mottle to seedlings of several species of tobacco, resulting in whitish spots. In serological diagnoses (DAS-ELISA) and dot-bot type hybridization using riboprobes marked with digoxigenin for detection of six different viruses that infect peach, only the virus Prunus necrotic ringspot virus (PNRSV. Ilarvirus) was detected in the collected samples with symptoms. The electrophoretic analysis of viral ds-RNA obtained from foliage with symptoms showed three bands of 3.6, 2.5 and 1.8 Kbp, molecular weight corresponding to the PNRSV genome. In all of the localities infections by PNRSV were verified in peach plants by direct sequencing of RT-PCR final point products, using extracts of viral ds-RNA as molds and specific oligonucleotides that amplify a 455 pb fragment of the capsid protein gene of this virus. Identity of PNRSV was confirmed by cloning and determining the primary structure of the viral RNA-3 component, which contains the open reading frames corresponding to the movement protein (MP) and the capsid protein (CP). Comparison of nucleotide sequences and the corresponding sequences in amino acids with PNRSV sequences available in the Genbank database, showed 98 % and 100 %, similarity, respectively. Phylogenetic analyses grouped the three characterized isolates into groups PE5-III and PV32-I. Together, the data presented indicate that the variants of PNRSV in Mexico do not differ from other isolates previously reported, suggesting a probable common origin.