Simple and robust DNA extraction method for the large-scale analysis of genotypes containing high polyphenolic content, such as landracesof Solanum tuberosum and Zea mays

• Autores: Macarena Barra, Erika R. Salazar, María Beltrán, Boris Sagredo D.
• Localización: Ciencia e investigación agraria: revista latinoamericana de ciencias de la agricultura, ISSN-e 0718-1620, Vol. 39, Nº. 3, 2012, págs. 593-601
• Idioma: inglés
• Títulos paralelos:
  • Método simple y robusto de extracción de ADN para análisis a gran escala de genotipos con alto contenido de polifenoles, como son variedades nativas de Solanum tuberosum and Zea mays
• Enlaces
  • Texto completo (pdf)
• Resumen
  • español

    La extracción de ADN de alta calidad es esencial para realizar estudios a nivel molecular, en diversas especies con abundancia de polifenoles en sus tejidos, como ocurren en las variedades tradicionales de papa y maíz, que dificultan una buena extracción de ADN genómico. Los polifenoles interfieren en la amplificación del ADN durante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), lo que dificulta realizar estudios de marcadores moleculares basados en PCR. Este artículo describe un protocolo simple y robusto de aislamiento de ADN aplicado a variedades tradicionales de papa y maíz obteniéndose una concentración alta, de gran pureza y calidad. El método desarrollado se basa en el de Krizman et al. (2006), con modificaciones, probándose en hojas de papa y hojas jóvenes de maíz. El método propuesto se comparó con un kit comercial de extracción de ADN y tres métodos descritos para extracción de ADN de plantas: uno descrito para plantas con altos contenidos de polifenoles (Keb-Llanes et al., 2002), un segundo descrito para Solanaceas y otras planta herbáceas (Fulton et al., 1995), y el método de Krizman et al. (2006) original basado en el uso de bromuro de cetyltrimethylammonio (CTAB)-y carbón activado. Mediante este método es posible aislar ADN desde genotipos de papa y maíz, con altos contenidos de polifenoles, y obtener ADN de alta calidad que puede ser utilizado para su uso en técnicas moleculares que involucren la reacción de PCR y el corte con enzimas de restricción. El método es de corta duración, similar a la del kit comercial, pero de menor costo. La cantidad de ADN de maíz extraído es superior al utilizar el método propuesto, en comparación con los otros métodos probados.

  • English

    The extraction of high-quality DNA is essential for studies conducted at the molecular level in species with an abundance of contaminants in their tissues, such as some landraces of potato and maize, in which it is difficult to extract good-quality genomic DNA. Compounds such as polyphenols interfere with the amplification of DNA during polymerase chain reaction (PCR), which makes it difficult to conduct PCR-based studies ofmolecular markers. This article describes a simple and robust protocol for DNA isolation that was applied to potato and maize landraces and resulted in a high DNA concentration with excellent purity and quality. This method is based on the method of Krizman et al. (2006) with some modifications and was tested on potato leaves and young maize leaves. The protocol was compared with one commercial DNA extraction kit and three methods that were previously described for plant DNA extraction: Keb-Llanes et al. (2002), for plants with high polyphenolic content; Fulton et al. (1995), which was developed for Solanaceae and other herbaceous plants; and the original Krizman et al. (2006) cetyltrimethylammonium bromide (CTAB)-activated charcoal method . The method proposed is suitable for isolating DNA Irom potato and maize genotypes with high polyphenol contents, yielding high-quality DNA that can be utilized for molecular techniques that involve PCR, cutting with restriction enzymes and other applications. The method is short, similar to a commercial kit, but cheaper. The amount of DNA extracted from maize using our method is superior compared with other published methods tested in this article.