Condiciones para la amplificación de microsatélites en cultivares de papa

• Autores: Martha Osorio Delgado, Ariadne Vegas García, Alexis Márques, Lourdes González
• Localización: Agronomía Tropical, ISSN 0002-192X, Vol. 61, Nº. 2, 2011, págs. 159-165
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Conditions for amplification microsatellites in potato cultivars
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    La identificación de cultivares de papa, Solanum tuberosum L., es de suma importancia para el manejo de bancos de germoplasma, programas de mejoramiento genético, análisis de diversidad genética, procesos de micropropagación y producción de semilla. Por su alto grado de polimorfismo, los microsatéli tes (SSR) han demostrado ser una herramienta muy poderosa para análisis de variabilidad, ademas es reproducible. El objetivo del trabajo fue estandarizar las condiciones para la amplificación de ADN utilizando cuatro accesiones provenientes del Banco de germoplasma del INIA-Mérida usando marcadores microsatélites. La extracción del ADN se realizó con un rápido, económico y confiable método. De los 24 iniciadores propuestos para estudios de diversidad se seleccionaron por su mayor contenido polimórfico12 marcadores. Los productos amplificados se resolvieron en geles de agarosa al 3%, teñido con bromuro de etidio. Se probaron diferentes metodos utilizados en estudios previos para diversidad genética e identidad en papa, siendo la de reducciones en las concentraciones de Taq polimerasa, cloruro de magnesio e iniciadores, así como en los tiempos del perfil térmico, la que permitió obtener patrones de fragmentos de ADN nítidos, precisos y reproducibles. Se establecieron concentraciones óptimas de 0,2 U de Taq polimerasa, 1,5 mM de MgCl2 y 0,2 μMM de iniciadores y se redujo 30 min en cada amplificación, obteniéndose una mayor eficiencia por reacción. De los 12 iniciadores, cuatro fueron seleccionados basados en su polimorfismo y la calidad de los fragmentos de ADN amplificados

  • English

    The identification of cultivars of potato, Solanum tuberosum L., is critical for the management of genebanks, breeding programs, genetic diversity analysis, processes micropropagation and seed production. Because of its high degree of polymorphism, microsatellites (SSR) have proved a powerful tool f or analysis of variability is also reproducible. The objective was to standardize the conditions for DNA amplification using four accessions from the germplasm bank of INIAMerida using microsatellite markers. DNA extraction was performed with a fast, economical and reliable method. Of the 24 primers proposed diversity studies were selected for their higher content polimórfico12 markers. The amplified products were observed in gels of 3% agarose, stained with ethidium bromide. We tested different methods used in previous studies for genetic diversity and identity in potato, being it possible to obtain DNA fragment patterns sharp, accurate and reproducible one whose optimum concentrations was 0.2 U of Taq polymerase, 1.5 mM MgCl2 and 0.2 μM of primers and 30 min decreased over time in each amplification, yielding greater efficiency per reaction. Of the 12 primers, four were selected based on their polymorphism and the quality of the amplified DNA fragments