Resumen de Rol de la Tropomiosina y del Adaptador NEDD9 durante la invasión celular de Listeria Mnocytogenes

Kattia Núñez Montero, Andreas Kühbacher, Jhonny Peraza Moraga, Pascale Cossart, Javier Pizarro Cerda

• español

  Listeria monocytogenes es un patógeno de animales y humanos que logra invadir el espacio intracelular gracias a la interacción entre proteínas bacterianas de superficie y receptores en células hospedero, lo que permite activar cascadas de señalización que promueven la internalización de esta bacteria. El silenciamiento de la expresión génica en células de mamífero gracias a la técnica de transfección de ARNs pequeños de interferencia (siARN) ha permitido recientemente asociar nuevos efectores moleculares al proceso de internalización de distintos patógenos intracelulares en células eucariotas. Esta investigación hace uso de esta técnica para determinar la posible contribución de la tropomiosina (TPM) y de la proteína adaptadora NEDD9 a la invasión celular por parte de L. monocytogenes, así como de Salmonella typhimurium y de una cepa de Escherichia coli que expresa la invasina de Yersinia pseudotuberculosis. Utilizando ensayos de invasión se demuestra que el silenciamiento de la expresión de TPM, pero no de NEDD9, reduce significativamente la entrada de los tres patógenos intracelulares estudiados. Mediante microscopía de fluorescencia se observa que el silenciamiento de TPM y NEDD9 afecta en forma diferente la morfología celular y la distribución de los filamentos de actina. Estos resultados sugieren que TPM puede modular la entrada de patógenos bacterianos mediante una modificación de las propiedades de reorganización de la membrana plasmática dependientes del citoesqueleto de actina, propiedades que difieren de aquellas afectadas por NEDD9. 

• English

  Listeria monocytogenes is an animal and human pathogen that it is able to invade the intracellular space due to the interaction between bacterial surface proteins and host cell receptors, activating signaling cascades that promote pathogen internalization. Gene expression silencing in mammalian cells by transfection of small interfering RNAs (siRNA) has recently allowed the implication of novel molecular effectors to the internalization process of different intracellular pathogens in eukaryotic cells. The present work takes advantage of this technique to determine to potential contribution of tropomyosin (TPM) and the adaptor protein NEDD9 to cell invasion by L. monocytogenes, as well as Salmonella typhimurium and an Escherichia coli strain that expresses the invasin from Yersinia pseudotuberculosis. Using gentamicin invasion assays, it is shown that only TPM expression silencing reduces significantly the entry in HeLa cells of the three investigated bacterial pathogens. Fluorescence microscopy demonstrates that TPM and NEDD9 silencing affects differently HeLa cell morphology and the distribution of actin filaments. These results suggest that TPM may modulate the entry of bacterial pathogens by modifying the reorganization properties of the plasma membrane which are dependent on the actin cytoskeleton, and that these properties differ from those affected by NEDD9.