Resumen de Clonación y expresión en Escherichia coli de genes de celulasas de Clostridium IBUN 22A

Lucy Carolina Vargas Pabón, Dolly Montoya Castaño, Fabio Ancízar Aristizábal Gutiérrez

• español

  El propósito de este trabajo fue construir una librería genómica a partir de la cepa nativa Clostridium IBUN 22A, utilizando como vector de clonación el plásmido pBluescrip® IIKS+/- y su expresión en Escherichia coli. La detec-ción de ocho clones recombinantes con actividad enzimática se realizó empleando el tamizaje enzimático con tres sustratos: celobiosa, carboximetilcelulosa y celulosa pulverizada (nativa). Los halos de hidrólisis fueron detectados por la técnica de rojo congo. Se realizaron análisis por restricción de tres de los plásmidos recombinantes represen-tativos de cada una de las actividades hidrolíticas, sobre los tres sustratos mencionados. Los tamaños de los insertos clonados fueron aproximadamente 1.600,13.000 y 11.000 pb para pBS68, pBS25 y pBS57, respectivamente. Mayores estudios de expresión proteica y caracterización enzimática permitirán definir la especificidad y otros parámetros característicos de estas enzimas. Así mismo, la secuencia de los insertos hará posible analizar y definir con más detalle la potencialidad biotecnología de nuestra cepa hacia la producción de solventes mediante el empleo de sustratos celulósicos como fuente de carbono para la fermentación acetona, butanol, etanol (ABE). 

• English

  Genomic library of the native strain Clostridium IBUN 22A was constructed, using plasmid pBluescriptlI® KS+/ - as cloning vector and its expression in Escherichia coli was evaluated. Eight recombination clones with enzymatic activity were detected by enzymatic screening and using the red-Congo test with three substrates: cellobiose, carboxymethyl cellulose (CMC) and cellulose powder (native). Restriction analysis of three recombination plasmids, representative of each enzymatic activity showed the inserted size (1600, 13000 and 11000bp approximately for pBS68, pBS25 and pBS57 respectively). More studies of protein expression and enzymatic characterization will allow theses enzymes and other typical parameters to be defined. In the same way the fragment sequence cloned will lead to a more detailed analysis and definition of the biotechnological potential of this strain regarding solvent production using cellulosic substrates for fermentation.