México
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Se realizó el primer monitoreo sistemático en granjas camaronícolas de Sinaloa y Sonora (México) para el diagnóstico presuntivo y confirmativo de la necrosis hepatopancreática (NHP), el primero por microscopia de luz (análisis en fresco y cortes histológicos con hematoxilina y eosina) y el segundo mediante el aislamiento de la bacteria en gradientes de Percoll, reacción en cadena de la polimerasa (PCR) y tinciones negativas al microscopio electrónico de transmisión (MET). Al microscopio óptico, los hepatopáncreas presentaron atrofia, estrangulamientos y necrosis en túbulos, con infecciones agudas por colonias bacterianas en el citoplasma del epitelio tubular, infiltración hemocítica y melanización. Mediante la PCR, los cebadores f 27 y r 235, dirigidos a una región específica del 16S rDNA, amplificaron un segmento de 209 pb en las extracciones de DNA de las muestras analizadas. Al MET se observó la presencia de bacterias pleomórficas, la mayoría ovoides o cilíndricas, de 0.2 μm de ancho y 0.6–0.9 μm de longitud, y con menor frecuencia la de formas helicoidales, con siete a doce giros o torciones, de 0.23 μm de ancho por 2.43–5.27 μm de longitud. Las herramientas de diagnóstico tradicional y molecular permitieron identificar con certeza al agente causal de epizootias como la causada por la bacteria NHPB en la región. Se describe también su prevalencia y distribución geográfica, además de descartar, mediante la PCR y los análisis microbiológicos, otros agentes etiológicos como el virus del síndrome de mancha blanca, el virus de la necrosis hipodérmica y hematopoyética infecciosa, el parvovirus hepatopancreático y la vibriosis
This paper describes the first systematic monitoring conducted in 2002 at shrimp farms in Sinaloa and Sonora (Mexico) for the presumptive and confirmative diagnosis of necrotizing hepatopancreatitis bacterium (NHPB) in Litopenaeus vannamei. Light microscopy (wet mounts and hematoxilin-eosin-stained sections of hepatopancreas) showed atrophy of the hepato-pancreas, strangulation and necrosis of the hepatopancreatic tubules, with masses of NHPB within the tubular epithelium, hemocytic infiltrates and tubular melanization. The gene encoding the 16S rRNA (16S rDNA) of NHPB was amplified by polymerase chain reaction (PCR) from clinical specimens and the bacteria isolated using Percoll density gradient centrifugation .Negative-stain transmission electron microscopy revealed pleomorphic bacteria, most of them ovoid or rod-shaped (0.2 μm wide and 0.6–0.9 μm long), and a helical form demonstrating seven to twelve spiral turns (0.23 μm wide and 2.43–5.27 μm long). Several severe epizootics of commercially grown L. vannamei occurred during the study period and the mortality was attributed to NHPB infection. Using PCR and microbiological an alyses, other etiologic agents, such as white spot syndrome virus, infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus, hepatopancreatic parvovirus and vibriosis, were ruled out as contributory factors.
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