Comparison of PCR protocols for detecting "Hictoplasma capsulatum" DNA through a multicenter study

• Autores: Mª José Buitrago Serna, Cristina Elena Canteros, Guadalupe Frías de León, Angel González, Manoel Marques-Evangelista de Oliveira, César O. Muñoz, José Antonio Ramírez Bárcenas, Adriana Inés Toranzo, Rosely Zancope Oliveira, Manuel Cuenca Estrella
• Localización: Revista Iberoamericana de Micología, ISSN 1130-1406, Vol. 30, Nº. 4, 2013, págs. 256-260
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  • español

    Antecedentes Se realizó un estudio multicéntrico en el que participaron cinco laboratorios miembros de la red MICOMOL a partir del programa CYTED. Los participantes recibieron un panel que contenía muestras de ADN de Histoplasma capsulatum, al igual que paneles con muestras de control negativas y de reacciones cruzadas.

    Objetivos el objetivo del presente estudio fue examinar la precisión de los diferentes protocolos de PCR para la detección de ADN de H. capsulatum.

    Métodos Se examinaron siete protocolos, todos ellos basados en técnicas de PCR, que empleaban como diana plásmidos unicopia o multicopia.

    Resultados la mayoría de estos protocolos (4/7) pudieron detectar las cantidades más pequeñas de ADN (102 fg/µl). La sensibilidad global fue del 86% y la especificidad del 100%. El protocolo basado en el plásmido unicopia SCAR220 se asoció a la menor sensibilidad (43%) pero a una especificidad del 100%. Los protocolos de PCR en tiempo real fueron muy reproducibles, sensibles y específicos. En ningún caso se detectaron resultados falsos positivos ni reacciones cruzadas.

    Conclusiones todos los laboratorios pudieron amplificar el ADN de H. capsulatum y las técnicas basadas en PCR en tiempo real parecen un instrumento prometedor para la detección eficiente de este patógeno en muestras clínicas.

  • English

    Background A multicenter study was conducted. A panel containing DNA from Histoplasma capsulatum, as well as negative and cross-reaction controls, was sent to five different laboratories, members of the MICOMOL network from CYTED Program.

    Aims The objective was to assess the accuracy of different PCR protocols to detect H. capsulatum DNA.

    Methods Seven different PCR protocols were tested. They were based on PCR techniques and used unicopy and multicopy targets.

    Results Most of these protocols (4/7) were able to detect the smallest amounts of fungal DNA (102 fg/µl). Overall sensitivity was 86% and specificity was 100%. The protocol based on a unicopy target (SCAR220) presented lower sensitivity (43%) but 100% specificity. The real-time protocols tested were highly reproducible, sensitive, and specific. Neither false positives nor cross-reactions were detected in any protocol.

    Conclusions All laboratories were able to amplify H. capsulatum DNA, and real-time PCR seems to be a promising tool to efficiently detect this pathogen in clinical samples.