Diagnóstico molecular de pacientes com lesões ativas de leishmaniose tegumentar Americana: KDNA pcr em amostras processadas em glicol metacrilato (GMA)

• Autores: A. F. L. Dornellas, T. P. Queiroz, M.P. de Oliveira, L. R. Pereira, R. Baptista
• Localización: The Biologist, ISSN-e 1994-9073, ISSN 1816-0719, Vol. 10, Nº. Extra 2 (julio-diciembre), 2012
• Idioma: portugués
• Texto completo no disponible (Saber más ...)
• Resumen

  • O diagnostico histopatologico de Leishmaniose so pode ser firmado com a observacao de formas amastigotas do parasito, tendo-se muitos casos com laudo de compatibilidade com a doenca, sem confirmacao, dificultando as decisoes terapeuticas. Isso acontece principalmente nos casos de infeccao por L. (Vianna) braziliensis, pelo baixo parasitismo tissular. O processamento de amostras de lesao em resinas plastica, como GMA, vem trazendo inumeras vantagens em relacao a inclusao em parafina, permitindo uma melhor observacao das alteracoes morfologicas e visualizacao das formas amastigotas no tecido. O diagnostico molecular tem se mostrado mais sensivel do que as tecnicas convencionais, permitindo a amplificacao de regioes do DNA do parasito, possibilitando maior precisao, alem de outras funcoes, tais como quantificacao da carga parasitaria, determinacao das especies, etc. Este projeto teve como objetivo o desenvolvimento de uma metodologia para realizacao de kDNA PCR de amostras de pacientes com leishmaniose, que encontravam-se incluidas em resina GMA. O estudo retrospectivo foi realizado no LIPMED/IOC/Fiocruz. Foram utilizadas 9 amostras de lesao de pacientes com suspeita clinica de leishmaniose tegumentar processadas em GMA. 40 cortes de 3m�Ý de cada caso foram digeridos em TEN 1x + 0.45% NP40 + 250 lg/mL of proteinase K em banho maria a 55oC por 24 horas. 2 £gL desta solucao foram usados na reacao de PCR utilizando-se iniciadores de regiao conservada de kDNA. A visualizacao das bandas de 120bp (compativel com Leishmania) foi realizada em gel de agarose corado om brometo de etidio. Como controle, foi utilizada amostra de baco de paciente com leishmaniose visceral. Dentre as 9 amostras testadas, 7 eram de pacientes com lesao cutanea (3 casos com diagnostico histopatologico positivo e 4 casos sem confirmacao na histopatologia) e 2 eram de pacientes com lesao mucosa (ambos com confirmacao histopatologica). Alem da amostra de leishmaniose visceral, foram observadas bandas de 120bp em quatro amostras de pele e nas duas amostras de lesao mucosa. Dentre as amostras de pele postivas na PCR, duas eram de pacientes sem confirmacao diagnostica na histopatologia. A realizacao de kDNA PCR em amostras processadas em resina GMA se mostrou bastante eficaz tantos em casos de lesoes cutaneas quanto em lesao mucosa. A metodologia desenvolvida pode facilitar o manejo clinico destes pacientes, devendo ainda continuar com a quantificacao da carga parasitaria e sua correlacao clinica.