Sustancias Oxígeno Reactivas (ROS) en Semen Congelado-Descongelado de Porcino

• Autores: Diana Vasco Mora, Marta Hernández Meroño, Juan María Vásquez, Emilio Martínez Hurtado, Jordi Roca Aleu
• Localización: Revista Ciencia y Tecnología, ISSN-e 1390-4043, ISSN 1390-4051, Vol. 1, Nº. 1, 2008, págs. 23-29
• Idioma: español
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    La generacion de ROS fue medida por citometria de flujo en muestras espermaticas descongeladas incubadas sin (niveles basales) o con (niveles inducidos) un inductor de ROS (1 mM de tert-butyl hidroperoxido) por 30 min a 39 ��C y 5% de CO2. Ademas, fueron simultaneamente tenidas con 2�f, 7�f-diacetato de diclorodihidrofluoresceina, acetil ester (1 mM, CM-H2DCFDA), para estimar la produccion de ROS e, ioduro de propidio (1.5 mM) para excluir la poblacion espermatica muerta. Los eyaculados de nueve verracos fueron congelados con 3% de glicerol y descongelados a .1200 o .1800 oC min-1. La produccion de ROS fue medida a los 0, 60, 120, 240 y 360 min en muestras mantenidas a 21-23 ��C (no incubadas), o a 39 oC y 5% de CO2 (incubadas). La velocidad de descongelacion no registro influencia (P>0.05) sobre la produccion de ROS. La generacion de ROS fue constante (P>0.05) en el tiempo en las muestras no incubadas, pero mostro un incremento progresivo en las muestras incubadas, siendo significativa (P<0.05) desde los 120 min en niveles basales o 60 min de incubacion en niveles inducidos. Ademas, una significativa variabilidad eyaculado/verraco fue evidente, tanto en niveles basales como inducidos en las muestras incubadas. La produccion de ROS basal e inducida estuvo significativamente (P<0.01) correlacionada con la calidad espermatica. La tecnica utilizada es de gran utilidad para evaluar capacidad funcional en espermatozoides congelados-descongelados; sin embargo, se requieren estudios adicionales para estandarizar la misma y establecer umbrales indicativos de perdida de calidad espermatica.

  • English

    The ROS generation was measured by flow citometry in thawed sperm samples incubated without (basal levels) or with (induced levels) a ROS inductor (1 mM tert-butyl hydroperoxide) for 30 min at 39 ºC and 5% CO2.

    Sperm cells were simultaneously stained with 2�, 7�-dichlorodihydrofluorescein diacetate, acetil ester (1 mM, CMH 2DCFDA), to estimate the production of ROS, and propidium iodide (1.5 mM) to exclude dead sperm from the analysis. The ejaculates from nine boars were frozen with 3% of glycerol and warmed at ~1200 or ~1800ºC min-1.

    The ROS production was measured at 0, 60, 120, 240 y 360 min in sperm samples hold at ~21-23 ºC (not incubated) or at 39 ºC and 5% CO2 (incubated) over time. Warming rate had not influence (P>0.05) on ROS production. ROS generation was constant (P>0.05) over time in not incubated samples, but it showed a progressive increase in incubated samples, being it significant (P<0.05) from the 120 min in basal levels or 60 min of incubation in induced levels. Significant (P>0.01) ejaculate/boar variability was evident in both basal and induced ROS production in the incubated sperm samples. Both basal and induced ROS production were significantly (P<0.01) correlated with the percentages of total and rapid progressive, motile and viable spermatozoa. The technique is of great utility to evaluate functional capacity in frozen-thawed sperms; however, additional studies are required to standardize the same one and to establish indicative thresholds of sperm quality loss.