Papel de PP2A en el control de la expresión de PPARa por fructosa en células FaO de hepatoma de rata

• Autores: Alba Rebollo, Marta Alegret Jordá, Nuria Roglans Ribas, Juan Carlos Laguna Egea
• Localización: Clínica e investigación en arteriosclerosis, ISSN 0214-9168, ISSN-e 1578-1879, Vol. 24, Nº. 2, 2012, págs. 82-88
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Role of PP2A in fructose mediated expression of PPARa on rat hepatoma FaO cells
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• Resumen
  • español

    Introducción: La suplementación de la dieta con un 10% (p/v) de fructosa en el agua de bebida durante 14 días en ratas produce hipertrigliceridemia y esteatosis hepática como consecuencia de una reducción en la expresión y en la actividad transcripcional de PPARa en el hígado. En el presente trabajo hemos estudiado en un modelo in vitro, la línea celular FaO, el posible mecanismo por el cual la fructosa reduce la expresión de PPARa.

    Material y métodos: Las células FaO se incubaron en ausencia o presencia de fructosa 25 mM. Se obtuvieron extractos totales y nucleares para la determinación de los niveles relativos de ARNm por RT-PCR, y de proteínas por Western Blot, de aquellas enzimas y factores de transcripción implicados en las alteraciones producidas por la fructosa. Asimismo, se valoró la actividad PP2A.

    Resultados: La incubación con fructosa redujo la expresión de PPARa y sus genes diana ACO y CYP4A1, e incrementó los niveles de proteína ChREBP y ARNm de su gen diana L-PK. El inhibidor de PP2A ácido okadaico anuló el incremento de la actividad PP2A mediado por la fructosa y evitó parcialmente la inducción de L-PK, pero no modificó la reducción de la expresión de PPARa, ni tampoco la de ACO y CYP4A1.

    Conclusiones: El aumento de los niveles de proteína ChREBP y de ARNm de L-PK, así como la represión de PPARa mediados por la fructosa, se reproducen en la línea celular FaO tratada con fructosa 25 mM. Los experimentos realizados en presencia de ácido okadaico sugieren que la activación de PP2A por metabolitos de la fructosa no juega un papel relevante en la reducción de la expresión de PPARa producida por la fructosa.

  • English

    Introduction: The addition of fructose in drinking water (10% w/v) for two weeks to rats induces hypertriglyceridemia and fatty liver by reducing the expression and transcriptional activity of PPARa in liver. Using an in vitro model, hepatoma FaO cells, we have studied the possible mechanism underlying the fructose-mediated reduction of PPARa expression.

    Material and methods: FaO cells were incubated with or without 25 mM fructose. Total and nuclear extracts were obtained and used to assess the relative levels of specific mRNAs by RT-PCR, and proteins by Western Blot, of those enzymes and transcription factors involved in fructose-induced alterations. PP2A activity was also determined.

    Results: Fructose treatment reduced PPARa mRNA levels. Consequently, the expression of ACO and CYP4A1, two PPARa target genes, also decreased. Incubation of FaO cells with fructose increased both protein levels of ChREBP and mRNA levels of L-PK. Okadaic acid, a PP2A inhibitor, blunted the fructose-induced increase in PP2A activity, and partially prevented the fructose-mediated induction of L-PK expression, but it did not modify the effect of fructose on PPARa and its target genes.

    Conclusions: Both the increase in ChREBP and L-PK expression, and the decrease in PPARa mRNA levels were reproduced in FaO cells incubated with 25 mM fructose. Experiments performed in the presence of okadaic acid suggest that activation of PP2A by intermediary metabolites of fructose is not involved in fructose-mediated decrease of PPARa expression.