Estandarización de la búsqueda y genotipado de polimorfismos de un solo nucleótido mediante DHPLC-AAS

• Autores: A Odriozola, José María Aznar Oviedo, Marian Martínez de Pancorbo Gómez
• Localización: Antropo, ISSN-e 1578-2603, Vol. 23, 2010, págs. 11-29
• Idioma: español
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• Resumen
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    El binomio Cromatografía Líquida de Alta Presión en condiciones Desnaturalizantes-Analizador Automático de Secuencias (DHPLC-ASS) presenta una elevada sensibilidad y especificidad en la búsqueda y genotipado de variaciones de tipo SNP (polimorfismos de base única), por lo que tiene aplicaciones tales como el diagnóstico molecular de mutaciones.

    Esta herramienta requiere de un fino diseño y optimización de la metodología de análisis de cada amplicón. En este trabajo se presentan pautas globales para la estandarización de los métodos de análisis por DHPLC-AAS. Así mismo se describen dos metodologías adicionales para incrementar el rendimiento del análisis por DHPLC que consisten en: a) la reducción del tiempo de análisis por DHPLC y b) la semiautomatización de la amplificación PCR mediante SDDA (Simple Dryed DHPLC Analisis).

    Este conjunto de métodos ofrece la posibilidad de obtener un elevado rendimiento del binomio DHPLC-AAS en cualquiera de sus múltiples aplicaciones.

  • English

    The combination of Denaturing High-Performance Liquid Chromatography and a Genetic Analyzer (DHPLC-GA) offers high sensitivity and specificity in the search and genotyping of SNP variations (Single Nucleotide Polymorphisms). Therefore, it represents a valuable approach for applications such as molecular diagnosis of mutations.This approach requires a fine design and optimization of the methodology necessary to analyze each amplicon. In this study we present the main guidelines for the standardization of analysis methods by DHPLC-GA. Furthermore, we describe two additional methodologies to increment the throughput of DHPLC analysis that consists of: a) reduction of time required for DHPLC analysis and b) semiautomatization of PCR amplification by SDDA (Simple Dryed DHPLC Analysis).

    The set of methods presented herein offers the possibility to obtain a highthroughput of the couple DHPLC-GA in all its many applications.