Determination of viability of "Phytophora capsici" oospores with the tetrazolium bromide staining test versus a plasmolysis method

• Autores: Aitzol Etxeberria, Sorkunde Mendarte Azcue, Santiago Larregla
• Localización: Revista Iberoamericana de Micología, ISSN 1130-1406, Vol. 28, Nº. 1, 2011, págs. 43-49
• Idioma: inglés
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• Resumen

  • Antecedentes: Las oosporas son los propágulos más persistentes de Phytophtora capsici. La viabilidad de las oosporas se puede determinar con métodos de tinción como el bromuro de tetrazolio (MTT).

    Objetivos: El MTT, y un método de plasmólisis, fueron comparados en su utilidad para determinar la viabilidad de las oosporas de P. capsici.

    Métodos: En cada procedimiento se compararon las reacciones de oosporas no tratadas (viables) y tratadas con calor letal (no viables) en diferentes cruces de aislados.

    Resultados: La plasmólisis proporcionó viabilidades menores que el MTT en casi todos los casos. La viabilidad estimada con MTT en oosporas autoclavadas osciló entre 26 y 35%, siendo nula la falsa positividad con plasmólisis. Los resultados determinados con ambas técnicas se correlacionaron significativamente (r = 0,998, P = 0,0001) en oosporas no tratadas (viables). La viabilidad de oosporas tratadas con calor en agua esteril a 52 .C (0-2-4-20 horas) en uno de los cruces ensayado mediante plasmolisis fue 81-4-0,7- 0% y mediante MTT fue 78-15,3-9-5,7% respectivamente, mostrando diferentes resultados en el otro cruce ensayado (57,7-1-1-0 y 50-7,3-7,7-9% respectivamente). Los resultados determinados con ambas tecnicas en el conjunto de oosporas (autoclavadas, calentadas 52 .C y no tratadas) mostraron una correlacion positiva significativa (r = 0,946, P < 0,0001), aunque el MTT sobreestimo la viabilidad cuando los valores se aproximaban a 0.

    Conclusiones: El MTT resulto una prueba no objetiva, inestable y con alta proporcion de falsos positivos al compararla con la plasmolisis en la que se obtuvieron resultados fiables. El MTT deberia usarse junto a otras tecnicas como la plasmolisis para determinar la viabilidad de las oosporas de P. capsici.