Evaluación de métodos de extracción de ADN de hojas de tomate secas y congeladas para detección de Begomovirus por PCR

• Autores: Carla Méndez, Alfredo Faría, Francisco Osorio Acosta, Alba Nava
• Localización: Interciencia: Revista de ciencia y tecnología de América, ISSN 0378-1844, Vol. 35, Nº. 11, 2010, págs. 823-827
• Idioma: inglés
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• Resumen

  • Seis protocolos de extracción de ADN para hojas de tomate [Solanum lycopersicum (Mill)] secas y congeladas fueron evaluados para la determinación de begomovirus utilizando la reacción en cadena de polimerasa (PCR). La comparación de los métodos de extracción se basó en la cantidad y calidad del ADN, costo de extracción y tiempo de procesamiento. Fueron evaluadas cuatro muestras de hojas de tomate secas y congeladas, recolectadas en los estados venezolanos de Zulia, Mérida y Táchira. La concentración de ADN y la relación de absorbancias a 260 y 280nm fueron determinadas por espectrofotometría.

    La detección de begomovirus se llevó a cabo utilizando cebadores degenerados para los componentes virales A y B (ADN-A y ADN-B), y la intensidad de las bandas de PCR se Seis protocolos de extração de DNA para folhas de tomate [Solanum lycopersicum (Mill)] secas e congeladas foram avaliadas para a determinação de begomovirus utilizando a reação em cadeia de polimerase (PCR). A comparação dos métodos de extração se baseou na quantidade e qualidade do DNA, custo de extração e tempo de processamento. Foram avaliadas quatro amostras de folhas de tomate, secas e congeladas, colhidas nos estados venezuelanos de Zulia, Mérida e Táchira. A concentração de ADN e a relação de absorvâsncias a 260 e 280nm foram determinadas por espectrofotometría. A detecção de begomovirus foi realizada utilizando cevadores degenerados para os componentes virais A e B (DNA-A e DNA-B), e a intensidade das bandas de PCR se registrou usando uma escala visual. O registró usando una escala visual. El método SDS produjo mayor cantidad y calidad de ADN, y es más económico y rápido que los otros protocolos de extracción ensayados. El ADN-B de begomovirus fue más consistente en la amplificación que el ADN-A, sugiriendo una mayor variabilidad del componente A.

    Los pellets de ADN resuspendidos minimizaron los efectos de inhibidores en la amplificación debido a la alta sensibilidad de la técnica de PCR, lo que también permitió la detección de begomovirus, incluso utilizando pequeñas cantidades de tejido de hojas secas y congeladas. El ADN aislado por el método SDS provee una opción sencilla y económica para la detección de begomovirus en tomate usando PCR, y podría ser empleado para estudios epidemiológicos de gran escala.