Determinación y cuantificación de bacterias acidolácticas por PCR en tiempo real

• Autores: Vienvilay Phandanouvong, Liliana Betancourt Fernández, Fernando Rodríguez A.
• Localización: Revista MVZ Córdoba, ISSN 0122-0268, ISSN-e 1909-0544, Vol. 15, Nº. 1, 2010, págs. 1897-1906
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Identification and quantification of lactic acid bacteria by real-time PCR
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    Objetivo. Establecer un ensayo de PCR-TR para determinar el tamaño poblacional y la composición de bacterias totales y de ácido lácticas, en particular las pertenecientes a los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium. Materiales y métodos. La especificidad de los iniciadores fue verificada utilizando la técnica de PCR convencional. Diluciones de 101 a 10- 4 ng/µl de ADN fueron preparadas a partir de cada cultivo microbiano y utilizadas en las curvas de calibración. La temperatura de disociación y la eficiencia de cada reacción de PCR-TR se determinaron con el software del iQCycler (Bio Rad®), versión 3.1. Resultados.

    Los juegos de iniciadores utilizados resultaron específicos para cada grupo microbiano, sin detectar reacción cruzada. Las eficiencias de las reacciones de la PCR-TR para bacterias totales, acidolácticas, Lactobacillus y Bifidobacterium fueron 104.4%, 98.1%, 113.3% y 103.3%, respectivamente. Conclusiones. Al obtener reacciones específicas y eficiencias cercanas al 100%, es posible cuantificar las poblaciones bacterianas totales, acidolácticas, Lactobacillus y Bifidobacterium con una alta especificidad. Por lo tanto, la técnica de PCR- TR puede utilizarse para monitorear cambios poblacionales bacterianos en ambientes como el tracto gastrointestinal de pollos de engorde, donde las bacterias acidolácticas, Lactobacillus y Bifidobacterium son habitantes comunes.

  • English

    Objetive. To establish a PCR-TR assay to assess the population size and composition of total bacteria, total lactic acid bacteria, and particularly bacteria of the genus Lactobacillus and Bifidobacterium in samples of the gastrointestinal tract of chickens. Materials and methods. The specificity of primers was verified using conventional PCR technique. Dilutions, 101 to 10-4 ng/µl, of bacterial DNA prepared from each microbial culture were used in the calibration curves. Melting temperature and efficiency of each RT-PCR reaction were determined using iQCycler software 3.1 (BioRad®). Results. The primers sets used were found to be specific for each bacterial group with no detectable cross reaction. Efficiencies of RT-PCR reactions for total bacteria, lactic acid bacteria, Lactobacillus and Bifidobacterium were 104.4%, 98.1%, 113.3% and 103.3%, respectively. Conclusions. As specific RT-PCR reactions were obtained and efficiencies of RT-PCR reactions were about 100%, the total bacteria, lactic acid bacteria, Lactobacillus and Bifidobacterium could be quantified with high specificity. Therefore, based on the results found in this study, the RT-PCR technique can be used to monitoring bacterial population shifts in environments such as the gastrointestinal tract of broiler chickens, where lactic acid bacteria, Lactobacillus and Bifidobacterium are common habitants.