Cultivo in vitro con colágeno y fibroblastos humanos de un equivalente de mucosa oral de espesor total

• Autores: S. González Méndez, Luis Manuel Junquera Gutiérrez, Ignacio Peña González, V. García Díaz, L. Gallego López, E García Pérez, A. Meana Infiesta
• Localización: Revista española de cirugía oral y maxilofacial: Publicación Oficial de la Sociedad Española de Cirugía Oral y Maxilofacial, ISSN-e 2173-9161, ISSN 1130-0558, Vol. 31, Nº. 2, 2009, págs. 98-106
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • In vitro culture with collagen and fibroblast of a full-thickness oral mucosa equivalent
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• Resumen
  • español

    Objetivos. El presente trabajo tiene por objetivo obtener, mediante cultivo in vitro, láminas de tejido oral en las que se pueda identificar las estructuras de una mucosa oral completa. La aplicación clínica del presente estudio permitiría, en determinados casos, la sustitución del empleo de injertos libres de piel o autólogos de mucosa oral por esta técnica. Material y Método. A partir de pequeñas biopsias de mucosa oral se hicieron cultivos primarios de queratinocitos. A partir de estos cultivos primarios se realizaron cultivos secundarios sobre una submucosa artificial constituida por colágeno y fibroblastos humanos. Se analizaron histológicamente sus características in vitro, y ulteriormente se procedió a la realización de injertos en ratones atímicos para conocer su comportamiento in vivo. Resultados. Los cultivos primarios fueron confluentes en un plazo mínimo de 10 días y máximo de 12 días, periodo similar al observado para la confluencia de los cultivos secundarios. El tiempo transcurrido desde la toma de la muestra hasta la obtención de una mucosa artificial completa osciló entre los 20 y los 22 días, mostrando las características histológicas de una mucosa normal. Tras 17 días de injerto en ratones inmunoincompetentes, sin ningún tipo de contingencia clínica,, la caracterización histológica e inmunohistoquímica (citoqueratinas 13 y 19, colágeno IV y laminina) confirmó la similitud de la mucosa in vitro con la mucosa oral sana. Conclusión. Es posible mediante técnicas de cultivo in vitro la obtención de un equivalente de mucosa oral completa con colágeno y fibroblastos. Si bien esta mucosa muestra un importante grado de retracción, su manejo clínico es muy favorable.

  • English

    Objectives. The objective of this study was to obtain, by in vitro culture, sheets of oral tissue in which complete oral mucoso structures can be identified. Clinical application of the findings of this study will allow the replacement of free skin grafts or autologous oral mucosa grafts by this technique in certain cases. Material and Method. Primary keratinocyte cultures were prepared from small biopsy samples of oral mucosa. Secondary cultures were prepared from these prímary cultures on an artificial submucosa constituted by collagen and human fibroblasts. The cell cultures were analyzed histologically in vitro and then used forgraft implants in athymic mice to study their behavior in vivo. Results. The primary cultures were confluent within a mínimum period of 10 days and máximum of 12 days, which is similar to the period that the secondary cultures required to reach confluence. The time from sampling to achieving a complete artificial mucosa ranged from 2 to 22 days. The artificial mucosa showed histologic chorocteristics of a normal mucosa. After 77 days of grait implantation in immunoincompetent mice without any clinical contingency, histologic and immunohistochemical characterízatíon (cytokeratins 19 and 13, collagen IV, and laminin) confirmed the similaríty of the mucosa in vitro to healthy oral mucosa. Conclusión. A complete oral mucosa equivalent can be prepared with collagen and fibroblasts using in vitro culture techniques. Although this mucosa shows considerable retraction, its clinical handling is very favorable.