Simplificación de la fertilización de ovocitos durante la producción in vitro de embriones bovinos

• Autores: Rodrigo Antonio Urrego Álvarez, Ariel Marcel Tarazona Morales, Martha Olivera Ángel, Omar Camargo
• Localización: Revista Colombiana de Ciencias Pecuarias, ISSN-e 0120-0690, Vol. 21, Nº. 3, 2008
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Simplification of oocytes fertilization during in vitro production of bovine embryos
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• Resumen
  • español

    El objetivo de este estudio fue evaluar un nuevo procedimiento de fertilizacion in vitro (FIV) de ovocitos bovinos, en el cual se omitio la centrifugacion de los espermatozoides para los procesos de lavado y seleccion espermatica. Dentro de cada uno de los pozos de los platos convencionales de cuatro pozos (pozos externos) se introdujo un nuevo pozo mas pequeno (pozos internos) de aproximadamente 50. Êl hecho en material de vidrio (0.3 mm de alto por 0.8 mm de diametro). El procedimiento consistio en llenar los pozos interno y externo con 700. Êl de medio de fertilizacion, hasta que el pozo interno quedara cubierto de medio, luego se depositaron 10 CCOs por pozo interno; luego 30. Êl de semen previamente descongelado se depositaron en el fondo del pozo externo. Despues de una hora se removio todo el contenido del pozo externo y se dejo el contenido del pozo interno con el medio y las celulas germinales por un periodo de incubacion de 16 h. Los presuntos cigotos fueron cultivados en medio CR1aa por un periodo de siete dias con un cambio de medio a las 72h. Como control, se utilizo un gradiente de Percoll 45-90% para la seleccion espermatica. La tasa de de ovocitos divididos fue de (70.8 vs. 73.1) y la proporcion de ovocitos que llegaron al estadio de morula y blastocisto fue de (18.8 vs. 20.3), respectivamente. Los resultados obtenidos con la nueva propuesta metodologica son similares a los obtenidos con la metodologia convencional (p<0.05). Estos resultados indican que ambos metodos producen resultados similares pero la nueva propuesta metodologica permite ahorrar tiempo, es menos laboriosa, consume menos reactivos y permite reducir la manipulacion de las celulas espermaticas con buenos efectos eventuales en el mejoramiento de los procedimientos de reproduccion in vitro.

  • English

    This study was conducted to evaluate an in vitro fertilization (IVF) procedure that avoids the washing-selection-centrifugation of spermatozoa prior to coincubation with oocytes. A special dish was constructed as follows: in the middle of each of the 4-wells of a conventional plastic dish (larger wells), another little (.50 Êl) glass dish (inner well) was placed (0.3 mm-tall x 0.8 mm in diameter), in such a way that when the larger plate was filled with 700 Êl of IVF media (Fert.TALP), the inner well was also filled up to overflowing. Ten in vitro matured oocytes were set into the inner well, and 30 Êl of thawed semen were placed on the bottom of the outer well. After one hour of incubation, the media from the outer well was removed, and the well with the remaining media and the germ cells, were incubated for 16 hours. Presumptive zygotes were cultured in a CR1aa media for seven days with a culture media replace at 72 h. As a control, a conventional IVF, using the classical 45%-90% Percoll gradient selection, was carried out. The cleavage rates (70.8 vs. 73.1) and the proportion of oocytes reaching morula and blastocyst stages (18.8 vs. 20.3) by the geasy-IVFh were similar to the results obtained by the classical method (p<0.05). These results indicate that the two methods yield similar results but the geasy-IVFh definitely saves time, human effort, reagents, and after all reduces the manipulation of the sperm with eventual good effects in the long run toward improving in vitro reproduction procedures.