Obtención de un anticuerpo contra la proteína p65 del virus de la tristeza de los cítricos y resultados preliminares de la expresión in vivo

• Autores: Yanneth Torres, Mónica Guzmán Barney, Orlando Chaparro, Oscar Oliveros, Orlando Acosta Fernández, José Peñaranda
• Localización: Revista Colombiana de Biotecnología, ISSN 0123-3475, ISSN-e 1909-8758, Vol. 5, Nº. 2, 2003, págs. 32-39
• Idioma: español
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• Resumen

  • El virus de la tristeza de los cítricos (CTV) pertenece a la familia Closteroviridae que incluye a los únicos virus vegetales que poseen en su genoma genes homólogos a las proteínas de choque térmico celulares HSP70. Recien­temente se ha demostrado que las proteínas virales HSP70h, como la p65 de CTV, realizan funciones para el ensam­blaje del virión, como proteína de unión a microtúbulos y de movimiento célula a célula. De allí la importancia de desarrollar trabajos relacionados con esta proteína en el CTV, considerado el patógeno más deletéreo para los cítricos. En el presente estudio, fueron utilizados cuatro péptidos sintéticos correspondientes a la región carboxi-terminal de la proteína de choque térmico p65 del virus de la tristeza de los cítricos (CTV), para inmunizar conejos con el objetivo de obtener anticuerpos policlonales. Todos los péptidos utilizados fueron inmunogénicos. Ninguno de los anticuerpos obtenidos reaccionó contra el extracto de plantas no infectadas pero sí detectaron las proteínas p65 presentes en los extractos proteicos de cítricos infectados con el CTV. Se demostró un comportamiento inmunológico del anticuerpo anti p65 que parece ser independiente de la severidad sintomática del aislado de CTV utilizado, sobre la base de la exposición del anticuerpo a dos aislados colombianos con características serológicas diferentes. Se demostró que el ORF que codifica en el CTV para el homólogo de la HSP70 se expresa in vivo aunque el anticuerpo anti p65 solamente detectó extractos proteicos concentrados de plantas infectadas, lo que apoya lo informado en otros estudios sobre la baja concentración de esta proteína en plantas infectadas con el CTV. Es la primera vez que se obtiene en Colombia un anticuerpo policlonal anti CTV y, particularmente, contra p65, proteína que interviene en el ensamblaje y movimiento viral. La adaptación de una técnica de obtención de anticuerpos anti p65 a través de la utilización de péptidos sintéticos como inmunógenos podría ser útil en un futuro para la detec­ción o diagnóstico de proteínas p65 presentes en diversos aislados colombianos de CTV y, especialmente, para desarrollar estudios que aporten mayor comprensión sobre la biología viral, su control y la relación con el huésped.