Resumen de Papel de los linfocitos T CD4+ en la destrucción ósea observada durante la periodontitis crónica

R. Vernal, Nicolás Dutzan, R. León, J. Gamonal

• español

  Propósito: La periodontitis crónica es una enfermedad de naturaleza inflamatoria y etiología infecciosa, caracterizada por la destrucción del aparato de inserción del diente, cemento radicular, ligamento periodontal y hueso alveolar, y que causa la pérdida de los dientes. Durante su desarrollo se establece un denso infiltrado inflamatorio celular, constituido principalmente por linfocitos T, con la capacidad de secretar una serie de citoquinas que participan en los eventos patogénicos de la enfermedad, regulando la inflamación de los tejidos periodontales y la destrucción del hueso alveolar. En la artritis reumatoide, la citoquina recientemente identificada RANKL (Ligando del receptor activador del factor nuclear kB) es expresada por los linfocitos T CD4+, participando directamente en los procesos de estimulación de la diferenciación osteoclástica y en la activación de osteoclastos maduros, y por lo tanto, en la destrucción ósea articular. El objetivo del presente estudio es determinar si mayores niveles de RANKL se encuentran asociados a la periodontitis crónica y si estos son sintetizados por los linfocitos T CD4+ reclutados en los sitios con periodontitis crónica.

  Material y métodos: En 33 pacientes mayores de 35 años de edad afectados de periodontitis crónica y 20 individuos controles sanos, se determinaron los niveles de mensajero de ácido desoxiribonucleico (mARN) de RANKL en biopsias de encía mediante transcriptasa reversa reacción en cadena de la polimerasa (RT-PCR) en tiempo real. A partir de las mismas biopsias, células gingivales totales fueron aisladas para inmunotipificar y cuantificar los leucocitos infiltrantes gingivales e identificar las células responsables de la expresión de RANKL mediante doble tinción por citometría de flujo.

  Resultados: Los pacientes con periodontitis mostraron mayores niveles de mARN de RANKL en comparación a individuos sanos, observándose que la expresión de RANKL se incrementó en 238, 3 veces con relación a los sujetos controles. Los individuos con periodontitis mostraron mayores porcentajes de linfocitos T CD4+ y CD8+ Además, una asociación entre RANKL y los linfocitos T CD4+ fue determinada mediante doble tinción por citometría de flujo.

  Conclusión: Estos datos demuestran que mayores niveles de RANKL se encuentran asociados a la periodontitis y que estos mayores niveles se pueden explicar en parte a la actividad de los linfocitos T CD4+ en el sitio de la infección. La determinación de la asociación entre la periodontitis crónica y la síntesis de RANKL constituye un interesante mecanismo molecular que contribuye a explicar en parte la destrucción tisular asociada y permite proyectar posibles nuevas estrategias inmunoterapéuticas que ayudarían a controlar la pérdida de tejido característica de la enfermedad periodontal.

• français

  But: La parodontite chronique est une maladie de nature inflammatoire et étiologie infectieuse, caractérisée par la destruction de l´appareil d´insertion de la dent, ciment radiculaire, ligaments parodontaux et os alvéolaire, et qui cause la perte des dents. Pendant son développement, un dense infiltré inflammatoire cellulaire est établie, constitué principalement par des lymphocytes T, avec la capacité de sécréter une série de cytokines impliquées dans les événements pathogéniques de la maladie, en régulant l´inflammation des tissus parodontaux et la destruction de l´os alvéolaire. La cytokine récemment identifiée dans larthrite rhumatoïde RANKL (ligand du récepteur activeur du facteur de transcription nucléaire kB) est exprimé par les lymphocytes T CD4+, et est directement impliqué dans les processus de stimulation de la différenciation des ostéoclastes, leur activation, et la destruction osseuse de l´articulation. L´objectif de la présente étude est de déterminer une possible association entre des niveaux élevés de RANKL et la parodontite chronique, et établir si les lymphocytes T CD4+ recrutés dans les emplacements avec parodontite chronique son les cellules qui sécrètent cette cytokine.

  Matériel et méthodes: Dans 33 patients ages de 35 années diagnostiqués de parodontite chronique et 20 individus contrôles sains, les niveaux de d´acide ribonucléique messager (ARNm) spécifique pour RANKL ont été déterminés sûr des biopsies de gencive par RT-PCR en temps réel. À partir de les mêmes biopsies, des cellules gingivales totales ont été isolées pour typifier et quantifier les leucocytes infiltrant de la gencive et identifier les cellules responsables de l´expression de RANKL par cytométrie de flux de double couleur.

  Résultats: Les patients diagnostiqués de parodontite ont des niveaux plus élevés de ARNm de RANKL en comparaison à des individus sains (238 fois), et des pourcentages de lymphocytes T CD4+ (7 fois) et CD8+ (5 fois) supérieurs à des individus sains. Une association entre les taux d´expression de RANKL et le pourcentage de lymphocytes T CD4+ a été déterminée par cytométrie de flux.

  Conclusion: Ces données démontrent que de plus grands niveaux de RANKL, que peuvent être expliqués en partie à l´activité des lymphocytes T CD4+ dans l´emplacement de l´infection, sont associés à la parodontite. La détermination de l´association entre la parodontite chronique et la synthèse de RANKL constitue un mécanisme moléculaire intéressant qui contribue à expliquer en partie la destruction tissulaire associée et permet de projeter de nouvelles stratégies immunotherapéutiques qui aideraient à contrôler la perte de tissu caractéristique de la parodontite chronique

• English

  Background: Chronic periodontitis is an infectious disease, characterized by alveolar bone destruction and teeth loss. Receptor activator of nuclear factor kB- ligand (RANKL) is an osteoclastogenic cytokine, central regulatory factor in the osteoclasts life-span and physiological and pathological bone resorption. Gingival T cells synthesize RANKL contributing to molecular local unbalance that entail to the alveolar bone resorption seen in periodontitis. Our study was aimed at associating the levels of RANKL with the CD4+ T cell activity present in gingival tissues of chronic periodontitis patients.

  Methods: Gingival biopsies were obtained from 33 chronic periodontitis patients and 20 healthy controls. Specimens were either formalin fixed and paraffin embedded for real-time reverse transcriptionpolymerase chain reaction (RT-PCR) and histological analysis, or tissue digestion processed for cell culture and flow cytometry analysis. RANKL mRNA and protein levels were determined by quantitative RT-PCR and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) in gingival cells culture supernatants. Gingival leukocytes were quantified by flow cytometry. RANKL and CD4 immunoreactivity was analyzed by flow cytometry and confocal microscopy.

  Results: RANKL mRNA levels were higher in periodontitis than in healthy subjects and spontaneous and LPSand PHA-stimulated RANKL synthesis were higher also in patients than controls. CD4+ T lymphocytes were the predominant infiltrate cell subset present in gingival tissues of periodontitis patients. Furthermore, an association between RANKL and CD4+ T cells was determined by double-staining flow cytometry and confocal microscopy.

  Conclusion: Taken together, these data demonstrate that gingival CD4+ T cells are the main cells responsible for the higher levels of RANKL observed in chronic periodontitis human patients.