Caracterización enzimática de la α-1,3-galactosiltransferasa bovina. Validación de un ensayo radiométrico y mecanismo cinético

• Autores: Ana Monegal, Vicent Bulone, Antoni Planas
• Localización: Afinidad: Revista de química teórica y aplicada, ISSN 0001-9704, Vol. 62, Nº. 519, 2005, págs. 505-512
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Caracterització enzimàtica de l'α-1,3-galactosiltransferasa bovina. Validació d'un assaig radiomètric i mecanisme cinètic
  • Enzymatic Chracterization of Bovine α-1,3-galactosyltransferase. Validation of a Radiometric Assay and Kinetic Mechanism
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• Resumen
  • español

    La α3-galactosiltransferasa (α3GT) cataliza la transferencia de galactosa del UDP-Gal (azúcar nucleótido dador) a un grupo N-acetillactosaminil o lactosil terminal en glicoproteínas y glicolípidos con formación de un enlace α-1,3 glicosídico. El sacárido terminal formado, Galα3NAcGalβ4Glu-R, es el principal determinante antigénico responsable del rechazo hiperagudo en xenotransplantes. Se implementa y valida un ensayo radiométrico para la determinación de la actividad enzimática de la α3GT, y se caracteriza el enzima recombinante (dominio catalítico) expresado en Eschericia coli. El enzima sigue un mecanismo cinético bi bi secuencial ordenado con unión del sustrato dador (UDP-Gal) seguido del sustrato aceptor para formar el complejo ternario productivo, con valores de KM de 30 μM para el sustrato dador y 1.2 mM para el aceptor lactosa.

  • català

    La α3-galactosiltransferasa (α3GT) catalitza la transferència de galactosa del UDP-Gal (sucre nucleòtid dador) a un grup N-acetillactosaminil o lactosil terminal en glicoproteïnes i glicolípids amb formació d'un enllaç α-1,3 glicosídic. El sacárido terminal format, Galα3NAcGalβ4Glu-R, és el principal determinant antigènic responsable del rebuig hiperagut en xenotransplantes. S'implementa i valguda un assaig radiomètric per a la determinació de l'activitat enzimàtica de la α3GT, i es caracteritza l'enzim recombinant (domini catalític) expressat en Eschericia coli. L'enzim segueix un mecanisme cinètic bi bi seqüencial ordenat amb unió del substrat dador (UDP-Gal) seguit del substrat acceptor per a formar el complex ternari productiu, amb valors de KM de 30 μM per al substrat dador i 1.2 mm per a l'acceptor lactosa.

  • English

    α3-galactosyltransferase (α3GT) catalyzes the transfer of galactose from UDP-Gal (the donor nucleotide sugar) to a terminal N-acetylactosaminyl or lactosyl group in glycoproteins and glycolipids, forming an α-1,3-glycosidic bond. The terminal saccharide formed, Galα3NAcGalβ4Glu-R, is the main antigenic determinant responsible for hyperacute rejection in xenotransplantation. A radiometric assay for determining α3GT enzymatic activity is implemented and validated, and the recombinant enzyme (catalytic domain) expressed in Escherichia coli is characterized. The enzyme follows an ordered sequential bi bi kinetic mechanism with binding of the donor substrate (UDP-Gal) followed by the acceptor substrate to form the productive ternary complex, with KM values of 30 μM for the donor substrate and 1.2 mM for the acceptor lactose.