Se desarrolló un método de cromatografía líquida de alto rendimiento cuantitativa y de separación utilizando una columna RP-18 eluida isocráticamente con metanol y agua (73:27, v/v) para analizar los compuestos activos isoméricos indigotina e indirubina presentes en el extracto de cloroformo del índigo natural. Se utilizaron soluciones estandarizadas de indigotina e indirubina para evaluar la linealidad, la precisión (replicabilidad), la exactitud y la especificidad del método. Los resultados mostraron una linealidad (r r2 > 0,999) de entre 1,8 y 16,2 µg/ml para la indigotina y entre 1,6 y 14,4 µg/ml para la indirubina. También se obtuvo un alto grado de especificidad, robustez, replicabilidad (desviación estándar relativa inferior al 5% para estándares y extractos) y exactitud (% de recuperaciones superior al 95%).
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