Resumen de Toma de muestras de plantas de piña infectadas con el wilt y puesta a punto del aislamiento de arn
Ermis Yanes Paz, Jessica Mendoza Rodriguez, Lisbet Pérez Bonachea, Rayza M. González Rodríguez, Lianet Rodríguez Cabrera, Yamilka Rosabal Ayán
La marchitez de la piña (Ananas comosus var. comosus (L.) Merril) es una enfermedad viral que afecta a este cultivo en diversas zonas geográficas del planeta. Es considerada la enfermedad más importante de la piña a escala mundial. En los campos de piña provoca pérdidas de hasta un 35 a 55% de rendimientos. Está asociada a un complejo de cinco ampelovirus (Closteroviridae). En Cuba Hernández (2019) realizó una prospección en diferentes áreas productoras de Cuba, que incluyó la provincia Ciego de Ávila, entre los años 2009 y 2012 para determinar los niveles de incidencia de estos virus. Según este estudio, los índices variaron desde 0.01 hasta el 100%. Sin embargo, luego de este estudio de hace más de una década no se han hecho nuevos estudios para determinar la distribución de la enfermedad en la provincia Ciego de Ávila. Por otra parte, el Centro de Bioplantas produce cantidades significativas de material de plantación de piña, mediante micropropagación que sin un debido testaje podría ayudar a la propagación de la enfermedad. Por lo que el objetivo de este trabajo consistió en la selección y síntesis de cebadores para la detección por PCR de PMWaV 1, 2 y 3 y la puesta a punto en el Centro de Bioplantas del aislamiento de ARN de piña para realizar la detección del wilt. Se tomaron muestras de hojas jóvenes de plantas que mostraban los síntomas típicos del wilt en áreas de la UBB frutales de la Empresa agroindustrial Ceballos. Se realizó el procedimiento para el aislamiento de ADN por dos protocolos diferentes. La síntesis de ADNc se realizó con el kit QuantiTect Reverse Transcription kit (Qiagen) y se realizó el PCR. Se comprobó la calidad del aislamiento de DNA y RNA lo que permitió comprobar la efectividad del procedimiento utilizado. De manera general se puede afirmar que el protocolo BPARNpiña rindió ARN más puro que el kit RNAeasy plant Minikit al mostrar menor presencia de contaminantes que absorben a 230 nm. con el protocolo desarrollado en este trabajo se obtienen mayores concentraciones de ARN y con mayor pureza que con el kit RNAeasy Plant Minikit. Esto constituye un logro importante pues se puede aislar ARN de calidad de forma barata con reactivos comunes de laboratorio y en un tiempo de 2h aproximadamente. Por otra parte, este protocolo es adecuado para aislar tanto ADN como ARN empleando los mismos reactivos lo que es muy conveniente pues dependiendo el estudio se puede elegir una molécula o la otra. Mediante el empleo de este protocolo se aisló ARN de los cultivares Española Roja, MD2, Pérola, y Cabezona y se sintetizó ADN complementario.
