Trampas extracelulares de neutrófilos (NETs) en trombos cardíacos: visualización y cuantificación mediante microscopía confocal

• Santos, Adrián ^[1] ; Martín, Paloma ^[1] ; Blasco, Ana ^[1] ; Solano, Jorge ^[1] ; García, Diego ^[1] ; Goicolea, Javier ; Bellas, Carmen ; Coronado, María José"
  1. [1] Instituto de Investigación Sanitaria Puerta de Hierro

     Instituto de Investigación Sanitaria Puerta de Hierro

     Madrid, España

     
• Localización: Dianas: revista de dianas terapéuticas, ISSN-e 1886-8746, Vol. 7, Nº. 1, 2018 (Ejemplar dedicado a: Actas del III Congreso de Señalización Celular, SECUAH 2018 / coord. por María José Carmena Sierra, Alberto Domingo Galán)
• Idioma: español
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• Resumen

  • Los neutrófilos son los leucocitos más abundantes en sangre y constituyen una parte esencial del sistema inmune innato, considerándose una de las primeras líneas de defensa frente a infecciones y daño tisular. Después de ser reclutados y activados en el sitio de inflamación pueden actuar través de los mecanismos de fagocitosis, degranulación, producción de citoquinas y liberación de Neutrophil Extracellular Traps (NETs). Los NETs se definen como estructuras de tipo red formadas por cromatina descondensada (histonas y ADN) y proteínas granulares y citoplasmáticas. La liberación de NETs da lugar a un tipo de muerte celular conocida con el nombre de NETosis, que consiste en una forma de defensa frente a bacterias, hongos, parásitos y virus, produciendo la detención de los patógenos y su destrucción gracias a la concentración de agentes antimicrobianos en el espacio extracelular. La desregulación del proceso de NETosis se ha relacionado con gran número de patologías autoinmunes, inflamatorias, metabólicas y cardiovasculares. En las enfermedades cardiovasculares concretamente, intervienen en el proceso de trombosis promoviendo la activación y la agregación plaquetaria, sirviendo de soporte a los eritrocitos, e induciendo la generación de trombina y el depósito de fibrina. Por todo ello, el análisis de NETs en muestras de tejido se ha convertido en un tema de gran interés para comprender su papel patológico en diversas enfermedades. En este trabajo hemos desarrollado un método semiautomático de visualización y cuantificación de NETs en muestras de aspirados de trombos intracoronarios embebidos en parafina. El estudio de la colocalización de las proteínas Mieloperoxidasa e Histona 3 Citrulinada, marca inequívoca de la presencia de NETs, mediante un doble marcaje con fluorescencia y la utilización de la técnica de Microscopía Confocal nos ha permitido analizar la presencia de NETs en trombos cardiacos. Se trata de un método de cuantificación fácilmente reproducible, que podría servir para estandarizar el estudio de NETs en muestras parafinadas y así poder comparar resultados obtenidos en distintos laboratorios.