Obtención de un marcador leucocitario anti-CD45 para citometría de flujo

• Grisel Rabell Velázquez ^[2] ; Suyén Rodriguez Pérez ^[2] ; Jeorge Fernández Duarte ^[2] ; Yanet Rivero Fernández ^[2] ; Katya Ramirez Tur ^[2] ; Mercedes Cedeño Arias ^[3] ; Rancés Blanco Santana ^[3] ; Elio Cisneros Prego ^[2] ; Rosa María Pérez Silva ^[1]
  1. [1] Universidad de Oriente

     Universidad de Oriente

     Venezuela

     
  2. [2] Laboratorio de Anticuerpos y Biomodelos Experimentales (LABEX)
  3. [3] Centro de Inmunología Molecular

  Mostrar afiliaciones +
• Localización: Revista Cubana de Química, ISSN-e 2224-5421, Vol. 29, Nº. 2, 2017, págs. 284-302
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Obtaining a anti-CD45 leukocyte marker for flow cytometry
• Enlaces
  • Texto completo
• Resumen
  • español

    El reactivo anti-CD45 conjugado con Isotiocianato de Fluoresceína (FITC) es útil para el diagnóstico y estudio de inmunodeficiencias de células T y B; en este trabajo para su obtención se modificó la relación entre el fluorocromo y el anticuerpo a conjugar mediante tres protocolos, partiendo de la proporción 1:2 recomendada. El anticuerpo fue purificado por cromatografía de afinidad, a una pureza de 99,3 %. Se evaluó la relación FITC/Proteína mediante la lectura del conjugado a 495 nm y 280 nm; y el porciento de reconocimiento leucocitario para citometría de flujo. El producto mostró buena actividad biológica con porcentaje de reconocimiento leucocitario en el rango de 90,7 % - 96,8 %, destacando el P-2 que permite del reactivo a un menor costo de producción, en comparación con el precio del producto importado; quedando establecido el proceso de conjugación para el anti-CD45 con FITC en el Laboratorio de Anticuerpos y Biomodelos Experimentales (LABEX).

  • English

    The reactive anti-CD45 is useful for the diagnostic and the study of T or B cells immunodeficiency. In this works were assayed three protocols with the purpose to obtain this reagent for the production, each one modifying the relation among the fluorochrome and the antibody (F:P) to conjugate, referred to the proposal of 1:2 recommended. The antibody was purified by affinity chromatography with 99,3 % of purity; was evaluated the relation FITC/Protein to 495 nm and 280 nm; and also, was obtained the leukocyte recognition percent through cytometry of flow by three tried protocols which evidence good biological activity (90,7 % - 96,8 %). The best protocol was P-2, with the lowest production cost and highest profits compared with product imported usually used in health system. This study permitted establishes the process to obtain anti-CD45 - FITC conjugated in LABEX laboratories.