Estandarización de protocolos de tranformación genética en Escherichia coli y para la generación de una colección de constructos génicos

• Gómez Arias, Linda Yhiset ^[1] ; Gómez Daza, Silvia ; Núñez Zarantes, Víctor
  1. [1] Corporación Colombiana de Investigación Agropecuaria
• Localización: Ciencia en Desarollo, ISSN-e 2462-7658, ISSN 0121-7488, Vol. 9, Nº. 2, 2018 (Ejemplar dedicado a: Vol 9, Núm. 2 (2018): Vol 9, Núm 2(2018): Julio- Diciembre), págs. 9-16
• Idioma: español
• Títulos paralelos:
  • Standardization of genetic transformation protocols in Escherichia coli and Agrobacterium tumefaciens for the generation of a collection of gene constructs
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• Resumen
  • español

    Una herramienta necesaria en la ingeniería genética de plantas son los vectores o constructos génicos que contienen genes reporteros, pues facilitan la estandarización de procedimientos de transformación genética. El objetivo de éste estudio fue evaluar protocolos de transformación genética para generar unprocedimiento que permitiera de manera rápida y con able obtener una colección base de constructosgénicos en Escherichia coli cepa DH5α y Agrobacterium tumefaciens cepas LBA 4404, EHA 105 y C58, empleando 25 vectores vectores binarios (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) que contienen los genes reporteros gfp y gus utilizando las técnicas de choque térmico y electroporación. La con rma- ción de los transformantes se realizó mediante PCR y cortes con enzimas de restricción (Eco RI y Xho I),lo que permitió veri car la presencia exitosa de éstos 25 vectores dentro de las bacterias empleadas. Losresultados indican que es necesario estandarizar los protocolos de transformación en las cepas bacterianas a utilizar porque no todas transforman con las mismas condiciones y éste trabajo puede ser un referente para la estandarización en otros laboratorios de transformación genética cuando se trabaja de manera masiva.

     

  • English

    An important tool in plant genetic engineering is the vectors or genic constructs that contain reporter genes, utilized to facilitate the standardization of genetic transformation protocols. The objective of this study was evaluate genetic transformation protocols for generate in a quick and confinable manner, a base collection of genic constructs in Escherichia coli strain DHα and Agrobacterium tumefaciens strains LBA 4404, EHA 105 y C58, using 25 binary vectors (pSK1019, pMP2482 y 23 de la serie pCAMBIA) that contain the reporter genes gfp and gus, by using the heat shock and electroporation techniques. The transformants confirmation was made by PCR amplification and by restriction enzymes assay with Eco RI and Xho I. These approaches allowed verifying the presence Successful of the 25 vectors inside the used bacteria. The results indicate that it is necessary to standardize the transformation protocols in the bacterial strains to be used because they do not all transform with the same conditions and this work can be a reference for the standardization in other laboratories of genetic transformation when working in a massive way.