Regulation of recombinant protein solubility and conformational quality in Escherichia coli

• Autores: Elena García i Fruitós
• Directores de la Tesis: Antonio Villaverde Corrales (dir. tes.)
• Lectura: En la Universitat Autònoma de Barcelona ( España ) en 2008
• Idioma: inglés
• Tribunal Calificador de la Tesis: Jordi Barbé García (presid.), Josep Vendrell Roca (secret.), Ursula Rinas (voc.), Rosa María Pintó Solé (voc.), Pau Ferrer Alegre (voc.)
• Materias:
  • Ciencias de la vida
• Enlaces
  • Tesis en acceso abierto en: DDD
• Resumen

  • La necesidad de conseguir procesos de producción de bajo coste y rápidos, han conducido a un uso creciente de las bacterias como organismos productores, hecho que ha permitido a muchas industrias farmacológicas comercializar un amplio abanico de proteínas recombinantes de interés. La producción de estas proteínas recombinantes en bacterias a menudo conduce a la formación, fruto de un proceso secuencia-específico, de unos agregados insolubles llamados cuerpos de inclusión. Los cuerpos de inclusión son y han sido durante muchos años un fenómeno que ha generado preocupación y se han descrito como estructuras refráctiles al microscopio óptico, altamente hidratados, resistentes a algunos detergentes, cilíndricos y de tamaño variable. Además, hasta ahora, también ha prevalecido la idea que estos agregados están formados por proteína inactiva, un hecho que ha restringido de manera notable el espectro de proteínas que han sido finalmente comercializadas por la indústria biotecnológica, ya que la forma inactiva no es útil. En mi trabajo de tesis he realizado un estudio detallado de la formación de dichos cuerpos de inclusión, así como de la proteína recombinante presente en la fracción soluble de las cepas productoras de éstos. Hemos podido ver que estos agregados presentan, contrariamente a lo que siempre se había creído, una actividad biológica considerable. De hecho, los cuerpos de inclusión no sólo presentan actividad, sino que además la proteína activa presente en éstos se encuentra dispuesta siguiendo un patrón característico. Sumado a todo esto, fruto de nuestros resultados, podemos afirmar que los cuerpos de inclusión, generalmente ricos en proteína recombinante, son estructuras en las cuales coexisten perfectamente proteínas con estructura nativa, y por lo tanto activas, con proteínas mal plegadas que adoptan una disposición en forma de láminas beta, características de los agregados amiloideos. Con el fin de explor