Resumen de Los orígenes de replicación de ²29
Julio Gutiérrez Hernández
La replicacion del dna del bacteriofago 029 de b. Subtilis tiene interes como representante significativo de un creciente grupo de sistemas biologicos cuyo genoma consiste en una molecula lineal de doble banda con una proteina unida covalentemente en sus extremos 5'. Adenovirus es el unico sistema del grupo mencionado cuyos mecanismos de replicacion se conocen con tanto detalle como los de 029. En la tesis presentada se demuestra el funcionamiento de ciertas secuencias de bases presentes en los extremos del dna de 029 como origenes de replicacion en un sistema minimo in vitro. Se caracterizan en primer lugar algunos requerimientos estructurales para la manifestacion de esa funcion, a saber, que cuando la proteina terminal se degrada, el residuo peptidico debe eliminarse de los extremos del dna, que las secuencias activas han de presentarse en dna de doble banda, al menos en un primer paso, y que deben localizarse exactamente en los extremos de la molecula de dna. Utilizando exonucleasas sobre plasmidos recombinantes de e.Col-i portadores de las secuencias teminales del dna de 029, se determinan los limites internos de las secuencias minimas activas dentro de los primeros 12 pares de bases, y, aplicando procedimientos de mutagenesis dirigida, se caracterizan las zonas de los origenes de replicacion donde los requerimientos de secuencia son mas estrictos. Finalmente se hace un estudio comparativo de las secuencias terminales del dna de 029 con las de los bacteriofagos de b. Subtilis evolutivamente proximos y se comparan tambien las actividades de los dnas de estos virus como moldes en el sistema de 029.
